ano1在自发性高血压大鼠血管中的表达及作用分析word格式论文.docxVIP

实验结果： 1. 与 Wistar-Kyoto（WKY）大鼠相比，在 SHRs 颈动脉、胸主动脉、肠系膜动 脉及其分支、股动脉及其分支组织中，ANO1 的蛋白（150kD±)表达均显著增多（P0.01）；在原代培养的 WKY 大鼠及 SHRs 主动脉及肠系膜动脉 SMCs 上 ANO1 的 蛋白表达水平亦表现出相似的结果； 2. 与来源于 WKY 大鼠主动脉及肠系膜动脉的 SMCs 相比，在来源于 SHRs 胸主 动脉及肠系膜动脉的 SMCs，可记录到更加强的钙激活氯电流，表明在血管组织中表 达的 ANO1 均为功能性 CaCC。利用 siRNA-ANO1 减弱原代培养的 SHRs 肠系膜动脉的 SMCs，所记录到的钙激活氯电流同未干扰的 SMCs 相比显著减弱；该结果表明，在 VSMCs 上所记录的钙激活氯电流是由 ANO1 介导的。 3. 给予糖苷酶 F 处理从 SHRs 及 WKY 大鼠胸主动脉中提取的蛋白后，检测发 现 ANO1 的蛋白分子量由处理前 150kD±下降至 130kD±的水平，表明在大鼠血管组 织中的 ANO1 蛋白存在着糖基化修饰。 4. 分别给予 1，2，5，10，20，30μmol/L 的 ANO1 特异性抑制剂 T16Ainh-A01 预孵育 SHRs 及 WKY 大鼠肠系膜动脉环 10min，然后给予 1μmol/L 的苯肾上腺素（PE） 收缩血管。结果显示，10μmol/L T16Ainh-A01 能够显著抑制 PE 诱导的 WKY 大鼠肠 系膜动脉环的收缩，并且能够引起 1μmol/L PE 预收缩的血管舒张；而 20μmol/L T16Ainh-A01 则能够明显抑制 PE 诱导的 SHRs 肠系膜动脉环的收缩效应，表明可能是 由于 SHRs 肠系膜动脉 ANO1 蛋白表达高于 WKY，故需更大浓度的抑制剂才能表现出 明显的抑制效应。在原代培养的 WKY 肠系膜动脉 SMCs，10μmol/L T16Ainh-A01 能够 减弱 PE 诱导的胞内钙荧光信号强度，说明抑制 ANO1 活性，可以通过降低 VSMCs 胞 内钙来引起血管舒张。 5. 选取 12 周龄的 SHRs 和 WKY 大鼠，尾静脉注射 ANO1 特异性抑制剂 T16Ainh-A01，检测 40min 内大鼠 SBP 及 DBP 的变化。结果显示，10μmol/L T16Ainh-A01 能显著降低 WKY 大鼠的 SBP 和 DBP；而 20μmol/L T16Ainh-A01 则能够明显降低 SHRs SBP 和 DBP；鼠尾静脉注射 siRNA-ANO1-Lipofectamin 混合物，减弱 SHRs 内源性 ANO1 的功能性表达，观察注射后 5d 以内 SHRs 血压的变化情况。结果显示，减弱内源性 ANO1 的功能性表达，能够显著抑制 SHRs 动脉血压（SBP 和 DBP）（P0.01）的升高。 上述结果表明减弱内源性 ANO1 的功能性表达能够降低 SHRs 的 SBP 和 DBP，延缓 SHRs 高血压的进展。由此说明，ANO1 可能参与了 SHRs 高血压的病理过程。 6. 在原代培养的 WKY 大鼠肠系膜动脉 SMCs， AngⅡ能够以浓度依赖性方式和 时间依赖性的方式显著促进 ANO1 的表达（P0.01）；给予 1 型 AngⅡ受体（AT1R） 特异性抑制剂替米沙坦能够显著抑制 AngⅡ诱导的 ANO1 的表达，而 AT2R 的特异性抑制剂 PD123319 则未表现出明显的抑制效应；表明 AngⅡ可能是通过 AT1R 介导促进 VSMCs ANO1 的表达。PI3K/Akt 是 AT1R 的下游信号分子。结果显示，SHRs 肠系 膜动脉中 Akt 的磷酸化水平较 WKY 大鼠显著升高；在原代培养的 WKY 肠系膜动脉 SMCs，AngⅡ能够以时间依赖性的方式提高 Akt 的磷酸化水平；给予 PI3K 的特异性 抑制剂 LY294002 能够显著抑制 AngⅡ诱导的来源于 WKY 大鼠的 VSMCs ANO1 的表达。 这一结果表明 Ang Ⅱ 诱 导 来 源 于 WKY 的 大 鼠 VSMCs ANO1 的 表 达 可 能 是 通 过 AT1R-PI3K-Akt 通路来实现的。 7. 同 WKY 大鼠肠系膜动脉相比较，SHRs 肠系膜动脉增殖细胞核抗原（PCNA） 表达显著增多，与原代培养的肠系膜动脉 SMCs 结果一致；MTT 的结果显示 AngⅡ能 够促进 WKY 大鼠源性 VSMCs 增殖；给予 ANO1 特异性抑制剂 T16Ainh-A01 能够显著抑 制 SHRs 源性 VSMCs 及 AngⅡ诱导的 WKY 大鼠源性 VSMCs PCNA 的表达；同时检测发 现，利用 siRN