ala介导的光动力疗法诱导皮肤癌a375细胞与a431细胞凋亡机制的研究word格式论文.docxVIP

目录英文缩略词 1中文摘要 2英文摘要 4前言 6材料与方法 81 实验材料 81.1 细胞系 81.2 主要试剂 81.3 主要仪器 91.4 主要溶液的配制 92 实验方法 112.1 细胞培养 112.2 MTT 比色法检测 ALA-PDT 对 A375 细胞与 A431 细胞的 杀伤作用 112.3 TUNEL 染色法检测细胞凋亡率 122.4 Western blot 方法检测凋亡相关蛋白 132.5 免疫组化-SABC 法检测 Cyt-c 的细胞定位 153 统计学分析 16结果 161 ALA-PDT 可显著杀伤 A375 细胞与 A431 细胞 162 TUNEL 染色法的检测结果 193 Western-blot 检测结果 204 免疫组化-SABC 法检测 Cyt-c 蛋白的表达 22讨论 23参考文献 27综述 31致谢 38英文缩略词英文缩写PDT英文全称photodynamic therapy中文注释光动力疗法PSphotosensitizer光敏剂ALAA3755-aminolevulinic acidhuman melanoma cells5-α 氨基酮戊酸人黑色素瘤细胞A431human epidermoid carcinoma cells人鳞状细胞癌细胞ROSreactive oxygen species活性氧MTTmethyl thiazolyl tetrazolium噻唑蓝PBSphosphate buffered solution磷酸盐缓冲液FBSfetal bovine serum胎牛血清DMSOdimethyl sulfoxide二甲基亚砜ssecond秒hhour小时dday天rpmrevolution per minute转/分TrisTris(Hydroxymethyl)aminomethane三羟甲基氨基甲烷SDSsodium dodecyl sulfate十二烷基硫酸钠TEMEDtetramethylethylenediamine四甲基乙二胺TBS PAGEtris-buffered saline polyacrylamide gel electrophoresisTris-Hcl 缓冲盐溶液聚丙基酰胺凝胶电泳TUNELterminal deoxynucleotidyl脱氧核糖核苷酸末端转移酶transferase-mediated dUTP nick endlabeling（TdT）介导的缺口末端标记法SABCstrept avidin-biotin complex链霉亲和素-生物素复合物BSAalbumin from bovine serum牛血清白蛋白ALA 介导光动力疗法诱导皮肤癌 A375 细胞与 A431细胞凋亡机制的研究硕士研究生 蔡晶晶导师 黄慧芳 教授中文摘要目的: 研究 5-α 氨基酮戊酸（ALA）介导的光动力疗法（ALA-PDT）对皮肤 癌 A375 细胞与 A431 细胞的杀伤作用及其诱导其凋亡机制，为 ALA-PDT 应 用于临床提供治疗参数和理论依据。方法： 以皮肤黑色素瘤 A375 细胞与鳞状细胞癌 A431 细胞为研究对象，1. 研究 ALA-PDT 对皮肤癌细胞的杀伤作用，A375 细胞与 A431 细胞与不同的 ALA 浓度孵育，在 PDT 作用后不同的时间，用噻唑蓝法（MTT）法检测其增 殖抑制率。2.研究 ALA-PDT 诱导 A375 细胞与 A431 细胞发生凋亡机制。首先 用 TUNEL 染色法分析 ALA-PDT 作用后 A375 细胞与 A431 细胞的凋亡率；接 着，用 Western-blot 方法检测 ALA-PDT 后两株细胞凋亡过程中，外源性凋亡 途径相关蛋白 Caspase8，线粒体凋亡途径相关蛋白 Bcl-2，Bax 与 Caspase9 以 及 Caspase3 与 PARP 的表达情况；最后，用免疫组化法检测 A375 细胞与 A431 细胞在 ALA-PDT 作用前后细胞色素 c（Cyt-c）在细胞内的分布情况，旨在从 内源性与外源性途径揭示 ALA-PDT 诱发皮肤癌细胞凋亡机制。结果： 1.MTT 比色法结果显示不同浓度的 ALA-PDT 组对 A375 细胞与 A431 细胞均有杀伤作用，并与 ALA 药物浓度和 ALA-PDT 作用后的时间密切相关， 在 0.4mmol/L ALA-PDT 作用后 4h，对 A375 细胞的增殖抑制作用达到最大程 度；在 0.6mmol/L ALA-PDT 作用后 8h，对 A431 细胞的增殖抑制作用达到最 大程度，趋于平衡。2.TUNEL 染色结果显示 ALA-PDT 作用后阳性反应在细 胞核染色质浓缩区出现棕黄色沉淀