anp对大鼠肝星状细胞活化的影响及其与tgfβ1smads通路的关系word格式论文.docxVIP

石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。研究生签名：时间：年月日使用授权声明本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文在学校图书馆保存并允许被查阅。有权自行或许可他人将学位论文编入有关数据库提供检索服务。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。必威体育官网网址的学位论文在解密后适用本规定。研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日目录中文摘要……………………………………………………………………………Ⅰ英文摘要……………………………………………………………………………Ⅱ英文缩略词表………………………………………………………………………IV前言…………………………………………………………………………………1第一部分SB431542对大鼠肝星状细胞（HSTT6）Smad蛋白细胞内转位及表达的影响…………………………………………………………………………………5第二部分心钠素对大鼠肝星状细胞活化的影响及其与TGF-β1/Smads 信号通路的关系…………………………………………………………………………… 第三部分心钠素联合SB431542对大鼠肝星状细胞活化TGF-β1/Smads信号通路的影响……………………………………………………………………………1725结论与展望…………………………………………………………………………28参考文献……………………………………………………………………………29文献综述……………………………………………………………………………31致谢…………………………………………………………………………………36作者简历……………………………………………………………………………37导师评语……………………………………………………………………………38摘要目的：探讨ANP(心钠素)、SB431542及其两者联合对大鼠肝星状细胞活化的影响，研究其是否通过阻断TGFβ1/Smads信号通路发挥抗肝纤维化作用。方法：(1)HSC T6细胞的培养：以10%胎牛血清DMEM(高糖)培养基培养，接种后8h细胞贴壁，24h换液， 72h增殖达生长面积90%消化传代，细胞传代周期稳定用于实验。(2)SB431542对HSCT6细胞活化的影响：分3组，空白对照组、SB431542 1umol/L组、SB431542 10umol/L组。采用免疫荧光法利用激光共聚焦显微镜观察细胞内Smad4蛋白细胞内转位情况。提取细胞浆蛋白及核蛋白，以Western-bloting 法检测Smad4蛋白表达水平变化。（3）ANP对HSCT6细胞活化的影响：分4组，空白对照未活化组、空白对照活化组、ANP1umol/L组、ANP10umol/L组。采用免疫荧光法利用激光共聚焦显微镜观察细胞内Smad4和pSmad2/3蛋白细胞内转位情况。提取细胞浆蛋白及核蛋白，以Western-bloting法检测 Smad4蛋白表达水平变化。收集细胞培养液，以Elisa法检测I型胶原、MMP-13表达量。（4）ANP联合SB431542对HSC T6细胞活化的影响：分4组，空白对照组、SB431542组、ANP组、ANP+SB431542组。提取细胞浆蛋白及核蛋白，以Western-bloting法检测Smad4蛋白表达水平变化。结果：（1）大鼠肝星状细胞生长良好，传代周期稳定，总体死亡率5%。（2）SB4315421umol/L、SB431542 10umol/L作用贴壁HSCT6细胞2h后,Smad4蛋白定位于细胞浆内，较正常对照组未向核内转位。作用24小时后，胞浆内Smad4蛋白表达量较空白对照组依次增多，胞核内Smad4表达量较空白对照组依次减少。（3）ANP1umol/L、ANP10umol/L作用贴壁HSCT6细胞1h后,正常对照组Smad4、pSmad2/3在核内表达；ANP1umol/L组约30%细胞在胞浆内表达，约70%细胞在胞核内表达；ANP10umol/L组在胞核内表达。同步作用HSC T6细胞1h后，胞浆内Smad4蛋白表达量较空白对照组依次增多，而细胞核内 Smad4蛋白表达量较空白对照组依次减少。空白对照组和ANP10umol/L组培养至24h，Elisa法检测细胞上清液I型胶原表达量，ANP作用组较空白对照组胶原表达量少，具有统计学意义；MMP-13表达量无明显差异。（4）Smol/L、AN