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Wash to remove unbound phage particles. Elute bound phage Amplify eluted phage Repeat selection Analyze a) ELISA b) Specificity c) Sequencing d) Affinity e) Activity E.coli 感染 和扩增 Hyperphage are made by an E. coli packaging cell line producing pIII from a gene integrated into its genome. When used for packaging of the single-chain antibody display plasmid pSEX, phage carrying several copies of the antibody are produced. The trypsin cleavage site linking the scFv fragment and the pIII can be used for protease elution after panning, thus allowing both physiological buffer conditions that do not affect phage integrity and restoration of wild-type pIII phenotype for reinfection. 诊断 被动免疫 抗体 蛋白质结构分析 药物导航 蛋白质纯化 应用范围： 受体—配体 信息传递 蛋白质—蛋白质 诘抗剂 蛋白质—DNA 抑制剂 蛋白质—其他 多肽 诊断 基因表达控制 中和活力 药物及药物导航 酶及底物 （1）较大的外源DNA片段被克隆以后，在噬菌体扩增过程中往往不稳定，很容易发生缺失等现象。 这可能是由于感染较短的噬菌体比长的噬菌体更具竞争优势所致。一般说来，克隆的外源片段不能大于lkb，克隆片段越大，发生缺失的频率越高。应避免在液体培养基中连续继代培养受感染后的细菌，这样可减少问题的发生(但不能完全消除)。另外应该用储存于-70℃下的重组噬菌体原液感染合适的宿主并铺平板，然后从一个分离良好的噬菌斑中央部位摄取细菌进行小规模培养，产生能满足大多数工作要求的足量单链DNA或双链RFDNA即可。培养的时间应尽可能短(通常4—8小时），视载体和宿主的情况而定，而且这种培养液不应作为原液继续培养。由于带大片段外源DNA的重组子细胞总比带野生型噬菌体的细胞长得慢，因此带野生型噬菌体的细胞具有选择优势，往往在几代连续液体培养过程后，即排除了原先的重组子。 五、M13噬菌体载体的缺陷 (2) 单链载体分子感染的细胞中往往单双链混杂，纯化某种类型的分子(尤其是双链分子)比较费力，同时由于重组DNA容易产生缺失，培养时间不能长，故所得DNA的量有限。 (3) 重组中，经常出现一些能以两种可能方向插入的裁体却仅以一种特定方向插入外源DNA片段的情况，这是因为外源DNA反向链的序列，在不同程度上干扰载体基因间区域的功能所致。 由于上述缺点，现在单链载体逐步被带有单链载体复制起始点的质粒载体——噬菌粒所代替。 第四节 噬（菌）粒载体（ Phagemid vector） 噬菌粒是一种特殊的质粒载体，这类载体是在质粒中插入丝状噬菌体主要基因间区域(1.3kb)，该基因间区域包含了丝状噬茵体DNA合成起始和终止的顺式