HPLC法测定头孢中5-巯基-1-甲基-四氮唑(MTT)含量.docVIP

HPLC法测定头孢中5-巯基-1-甲基-四氮唑(MTT)含量 　　【中图分类号】R595.3 【文献标识码】A 【文章编号】1672－3783(2011)12－0257－01 　　【摘要】本文对头孢中含有的杂质5-巯基-1-甲基-四氮唑（MTT）的含量测定方法进行了较为详细的方法学研究，并制定了含量的HPLC方法。实验结果表明，MTT在2.52～30.24μg/ml范围内浓度与色谱峰面积线形良好，定量检出限浓度为0.068μg/ml，6次进样结果的相对标准偏差为0.85%。 　　【关键词】高效液相色谱；戒酒硫样反应；5-巯基-1-甲基-四氮唑（MTT） 　　Determination of MTT content in Cephalosporin with HPLC 　　Zhou Hongmei1 ，Li xinggen2 　　【Abstract】This paper has a detail research in determining MTT content in cephalosporin, and set up a method with HPLC. The result shows, the relationship in content and peak area, MTT give a good linear in 2.52-30.24ug/ml with HPLC. Detection limit of concentration is 0.068ug/mL,the RSD is 0.85% in six injections. 　　【Keywords】HPLC；Disulfiram like reaction；MTT 　　前言 　　 近年来,头孢类抗生素的应用越来越广泛,特别是头孢哌酮舒巴坦因其抗菌谱广,抗菌作用较好,临床应用较多, 但出现越来越多的戒酒硫样反应，戒酒硫样反应系药源性急症,患者可出现发热、头痛、面部猩红,重者出现呼吸困难、胸痛、恶心、呕吐、血压下降甚至休克。经进一步研究发现，戒酒硫样反应与头孢中含有的杂质5-巯基-1-甲基-四氮唑（MTT）的含量直接相关，因此控制头孢中MTT的含量对临床有着极其重要的意义。 　　1 实验部分 　　 1.1 仪器与试药:Agilent 1200四元泵、二极管阵列检测器、Agilent工作站；色谱柱：DiamonsilTM（钻石）C18色谱柱（4.6×150mm，5μm）。 　　 试剂：乙腈为色谱级；四丙基溴化铵、醋酸钠、醋酸均为分析纯。 　　 试药：注射用头孢哌酮钠（苏州万庆药业有限公司；国药准字；（华北制药股份有限公司；国药准字；（广州白云山天心制药股份有限公司；国药准字。 　　 1.2 色谱条件:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以四丙基溴化铵溶液（0.2%）：乙腈：醋酸-醋酸盐pH值5.0（82：14：4）为流动相；检测波长为254nm。 　　 1.3 检查波长的验证:取5-巯基-1-甲基-四氮唑适量，用流动相溶解并稀释制成??1ml中含20μg的溶液，在200nm～400nm范围内进行紫外扫描，结果5-巯基-1-甲基-四氮唑于227.5nm处有最大吸收，参照日本JP15收载的头孢替坦二钠对杂质5-巯基-1-甲基-四氮唑检测波长［1］，确定采用254nm为注射用头孢哌酮钠中杂质5-巯基-1-甲基-四氮唑检查的检测波长。 　　2 结果与讨论 　　 2.1 5-巯基-1-甲基-四氮唑（MTT）的定位:取5-巯基-1-甲基-四氮唑适量，用流动相溶解并稀释制成每1mL中含20μg的溶液（浓度与注射用头孢哌酮钠有关物质对照溶液等同），取上述杂质5-巯基-1-甲基-四氮唑对照品溶液和注射用头孢哌酮钠有关物质检查项下供试品溶液，按上述确定的色谱条件，进样20μL并定位，结果5-巯基-1-甲基-四氮唑于保留时间3.495分钟出峰，有关物质供试品溶液中头孢哌酮钠保留时间为10.225分钟，同时分离出保留时间分别为3.493、7.430分钟的2个主要杂质。 　　 另取上述5-巯基-1-甲基-四氮唑溶液与注射用头孢哌酮钠有关物质检查项下供试品溶液按1：1混匀后进样，结果5-巯基-1-甲基-四氮唑于保留时间为3.493分钟，与原供试品溶液中保留时间为3.493分钟的杂质峰重叠。我们通过二极管阵列检测器，对分别单独进样的5-巯基-1-甲基-四氮唑溶液和注射用头孢哌酮钠有关物质检查项下供试品溶液的两份图谱，进行谱库匹配分析，结果两谱图匹配值为998大于要求的匹配阈值950，表明5-巯基-1-甲基-四氮唑与与原有关物质检查项下供试品溶液保留时间3.493分钟杂质为同一成分。 　　 为进一