菠菜叶片叶绿体的提取实验设计.docxVIP

菠菜叶片叶绿体的提取一、实验目的：用简单的方法制备完整的叶绿体，且使得叶绿体的获得率较高。通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理与方法。了解差速离心特点与用途。二、实验原理： 将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法，一个颗粒在离心中的沉降速率取决颗粒的大小、形状和密度，也同离心力以及悬浮介质的粘度有。在一给定的离心中，同一时间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速度不同。依次增加离心力和离心时间，就能够使非均一悬浮中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部，分批收集即可获得各种亚细胞组分，即为差速离心法。叶绿体的分离应在等渗溶液(0.35mol/L氯化钠或0.4mol/L蔗糖溶液)中进行，以免渗透压的改变使叶绿受到损伤。将匀浆液在1500r/min的条件下离心5min，以去除其中的组织残渣和一些未被破碎的完整细胞。然后，在3500r/min的条件下离心510in，即可获得沉淀的叶绿。三、实验对象：提取新鲜的菠菜叶片的叶绿体。四、实验条件：实验材料：新鲜的菠菜叶片，一般选取刚见太阳不久的菠菜叶，以叶片挺厚嫩为佳。实验器材：普通离心机、研钵、粗天平、显微镜、烧杯、量筒、滴管、离心管、纱布、载玻片和盖玻片。实验试剂：0.35mol/L NaCl溶液。五、实验步骤：选取新鲜的嫩菠菜叶片，洗净擦干后去除叶脉，称30g，剪碎放入研钵中，加入150mL 0.35mol/L NaCl溶液。在冰浴下用研钵匀浆（把研钵放在冰袋上研磨即可）。用2层纱布过滤未被研磨的碎片，去碎片。再用8层纱布过滤去细胞，以烧杯收集。将滤液转至离心管在1500r/min下离心5min，取上清液。将上清液在3500r/min下离心10min,弃上清液，沉淀即是叶绿体将沉淀浮于少量0.35mol/L NaCl溶液中，制成叶绿体悬液。取叶绿体悬液一滴滴在载玻片上，加盖玻片后在显微镜下观察。六、实验结果预测及分析我们可以在低倍显微镜下观察到绿色橄榄型的叶绿体颗粒，在高配镜下可看到叶绿体均匀分布，内部含有较深的绿色颗粒即为基粒。差速离心法分离得到的叶绿体纯度不是太高，可能会对实验观察结果造成影响，若想减小此误差，可采用密度梯度离心法。