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实验 九 2,6-二氯酚靛酚滴定法测定L-抗坏血酸的含量 一、目的 掌握滴定法测定Vc含量的基本原理和操作。 二、原理 还原型Vc能与氧化剂染料2,6-二氯酚靛酚作用,染料本身被还原成无色的衍生物,同时还原态的Vc被氧化成脱氢Vc。 VC 滴 定 法 在滴定管中弱碱性的2,6-二氯酚靛酚染料是蓝色的。 染料滴入锥形瓶中,酸化蒸馏水使染料变成弱酸性,再与VC作用被还原成无色。 随着染料用量增加, VC还原能力下降,直到终点,溶液由无色到红色。 染料滴定消耗的量与瓶中的VC浓度成正比。 三、实验材料及设备 1.材料 新鲜松针 2.仪器 电子天平 离心机 3.器材 微量滴定管:5mL×1 移 液 管: 10mL×1 容 量 瓶: 50mL×1 量 筒: 10mL×1 锥 形 瓶: 50mL×6 研 钵: 1套 微量滴定管 微量滴定管是测量小量积液体时用的滴定管,容积有1~5 mL各种规格,最小分度值为0.005或0.01 mL。 四、试剂 1、偏磷酸-醋酸溶液 2、2,6-二氯酚靛酚溶液 分别称取2,6-二氯酚靛酚260mg、碳酸氢钠210mg,用热蒸馏水250mL溶解并定容至1000mL;过滤;置于棕色瓶中,贮于冰箱中备用。有效期一周。使用前需标定。 3、标准Vc 秤取抗坏血酸结晶50mg溶于偏磷酸-醋酸溶液并定容支250ml。装入棕色瓶,贮于冰箱内。 五、操作步骤 1. 2,6-二氯酚靛酚溶液的标定 取5ml标准抗坏血算溶液加入5ml偏磷酸-醋酸溶液。 用2,6-二氯酚靛酚滴定,以生成为微玫瑰红色持续15秒不退色为终点。 以每ml 2,6-二氯酚靛酚溶液相当于抗坏血酸的mg数来表示。 2.样品液的制备 (1)取材:称取新鲜松针1g,至于研钵中。 (2)研磨:研钵中加酸化蒸馏水10ml,并加入少许石英砂,用锤子研磨至匀浆状。 (3)离心:将匀浆液移入离心管内,离心4000转/分5分钟。 (4)定容:将离心后的上清液移入容量瓶内,用酸化蒸馏水定容至50ml,混匀,备用。 3、样品的测定 4.空白对照滴定 另取10ml酸化蒸馏水做空白对照进行滴定。 六. Vc含量的计算 生物材料中Vc的含量(mg/100gFW) = 七 注意事项 1.操作要尽可能快,不要超过2分钟。并防止与铁铜器具接触,以减少VC的氧化。 2.样品提取液避免强光直射。 3. 酸化蒸馏水具有抑制氧化酶,保护VC作用。在颜色反应中还提供了酸性条件。 4.要使结果正确,滴下使用的2,6-二氯酚靛酚溶液在1-4ml之间。 八、思考题 用滴定法测定生物材料中Vc的含量有什么优 缺点? * * 生化分析实验 氧化型2,6-二氯酚靛酚 (弱碱性,蓝色) 还原型VC 氧化型VC 还原型2,6-二氯酚靛酚 (弱酸性,无色) 氧化型染料 (弱酸性,红色) H+ H+ 规定:三角瓶中,由无色变为微红色,15秒钟内不消失,是滴定终点。 * * * 吸取待测样液10mL,放入锥形瓶中, 立即用2,6-二氯酚靛酚溶液滴定样品,呈微弱的玫红色,持续五秒不退为终点。记录滴定液体积。 (VA–VB) × S×100 W S为1ml2,6二氯酚靛酚溶液相当于维生素C的mg数。 W为10ml样品提取液中含样品的克数。 *

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