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（三） HPLC法 人血浆中Vit C浓度的HPLC法测定 第四节 维生素D的分析 胆甾醇 7-脱氢胆甾醇 维生素 D3 麦角甾醇 维生素 D2 维生素D2 维生素D3 一、性质 溶解性 不稳定性 旋光性 显色反应 紫外吸收 二、鉴别 显色反应 比旋度 其它方法 D2、D3的区分 三、杂质检查 1、麦角甾醇的检查　　　　 　　90％乙醇溶解后，加洋地黄皂苷溶液，放置18h，不得发生浑浊。 2、前维生素D的光照产物 　　　　λ＝280nm~320nm 四、含量测定 正相HPLC 固定相：硅胶 流动相：正己烷－正戊醇（97：3） 检测波长：254nm 第一法：用于无维生素A醇及其他干扰的供试品 第二法：(1)皂化提取 ;(2)净化用色谱柱系统分离收集维生素D，得供试品溶液B;(3)按第一法进行测定。 第三法：当样品经皂化提取及净化用色谱系统分离收集后，前维生素D峰仍受干扰时，采用此法。 第五节 维生素E的分析 R1 R2 ﹡ ﹡ Vit E (dl-α-Tocopheryl Acetate) Synthetic Natural 不同异构体的生理活性 一、性质 溶解性 水解性 氧化性 紫外吸收 △ 二、鉴别 1.硝酸反应 生育酚 HNO3 （橙红色） 生育红 2.三氯化铁反应 生育酚 [O] 对-生育醌 已被GC取代 3.UV 0.01%无水乙醇中，λmax = 284nm， λmin = 254nm 4.TLC 5. 其它方法 三、杂质检查 1.酸度 2.生育酚 取Vit E 0.1g，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺T.S.1滴，用硫酸鈰滴定液(0.01mol/L)滴定，消耗硫酸鈰滴定液(0.01mol/L)不得过1.0ml 四、含量测定 1.GC——Ch.P 载气→N2 固定液→硅酮（OV-17） 担体→硅藻土或高分子多孔小球 柱温→265℃ 检测器→氢火焰离子化检测器(FID) 内标→正三十二烷 n ≥ 500 R≥2 24.40′内标 14.54′VE USP 内标 十六酸十六醇酯 R≥1.0 内标液 取正三十二烷加正己烷溶解并稀释成1.0mg/ml溶液 对照液 精密称取VitE对照品0.2011g置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标液10ml，密塞，振摇使溶解，取 1~3μl注入GC仪，测定，计算校正因子 供试液 精密称取供试品0.1998g置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标液10ml，密塞，振摇使溶解，取1~3μl注入GC仪，测定，计算含量。 2.HPLC——JP 样品→ dl－α－生育酚 固定相→十八烷基硅烷键合硅胶 流动相→甲醇-水（49 ：1） 检测波长→292nm R＞2.6 RSD≤0.8% 3.FLD——同步荧光扫描 P.277 第六节 复方制剂中维生素的分析 一、离子对HPLC测定维生素 色谱柱→ODS 流动相→A: MeOH:H2O=(200:800)[含1.1615g樟脑磺酸] B: MeOH 检测波长→脂溶性:280nm；水溶性:272nm 内标→苯酚 水溶性维生素供试液配制 取维生素片粉，精密称定，置棕色量瓶中，加DMPS 100μl，内标液5ml，流动相A溶解稀释至刻度，摇匀，过滤，备用。 水溶性维生素供试液配制 取维生素片粉，精密称定，置棕色量瓶中，加DMPS 100μl，甲醇溶解稀释至刻度，摇匀，过滤，备用 二、RP-HPLC测定水溶性维生素 色谱柱→ODS 流动相→A: buffer(0.05M KH2PO4,0.2% 三乙胺,pH6.0):ACN =(97:3) B: MeOH 梯度洗脱程序→(0min)A:B(90:10)→ (20min)A:B(60:40) → (30min)A:B(90:10) 流速→1.0ml/min 检测波长→210nm 柱温→室温 三、非水RP-HPLC测定脂溶性维生素 色谱柱→ODS 流动相→ACN:MeOH=(80:20) 流速→1.0ml/min 检测波长→265nm （二）性质 溶解性 易溶于水 水溶液呈酸性 2 酸性 C3－OH的酸性较强。pK1 = 4.17，C2－OH的酸性较弱pK2 = 11.57。故表现为一元酸的性质。能与碳酸氢钠成钠盐。 二烯醇结构 二酮基结构 强还原性 二烯醇结构的还原性极强 有