细胞凝集实验.docVIP

细胞凝集反应实验报告 【实验目的】 了解细胞膜的表面结构。 掌握凝集素促使细胞凝集的原理。 学习研究细胞凝集反应的方法。 【实验原理】 细胞凝集指细胞与细胞之间通过某种凝集素的作用而相互粘连在一起的现象，最终形成大的细胞团块，在不用显微镜时即可用肉眼看到的明显的现象。 凝集素是一种能够与糖类物质特异性结合的糖蛋白，具有一个以上同糖结合的位点，因此能够参与细胞识别和粘连，从而将不同的细胞联系起来。常见的凝集素有刀豆素A、麦胚素、花生凝集素、大豆凝集素等。凝集素主要的作用就是凝集细胞和刺激细胞分裂，在细胞间形成“桥”的作用，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。 细胞的凝集与细胞的细胞膜有关，细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构，脂和蛋白质又能与糖分子结合为细胞表面的分枝状糖外被，目前普遍认为，细胞间的联系，以及细胞的生长分化，免疫反应等都与细胞表面的糖蛋白有关。 细胞凝集的作用很多，机体免疫中反应中，细菌等颗粒性病原体会与凝集素结合而产生凝集反应，从而被更好的清除。 细胞凝集在实际中应用广泛，在临床上血细胞的凝集作用可用于血型鉴定，同时凝集素可以作为饲料添加剂，帮助抵御感染。 【实验材料】 试剂：土豆凝集素（已制备好）、1% 兔血红细胞悬液、PBS缓冲液、生理盐水。 仪器：移液管、离心管、离心机、有凹坑的载玻片、带刻度的试管若干、显微镜。 【实验步骤】 1、 检查实验所用的仪器是否完备，完好，准备实验； 2、 凝集素制备 土豆切片，取2g放入10mL的PBS缓冲液中浸泡2h，获取土豆凝集素（此步骤已有老师准备好）； 3、 1%家兔红细胞悬液制备 以无菌方法抽取兔耳缘静脉血液（5mL注射器先吸取3mL1%肝素溶液），加3mL0.9%氯化钠溶液，3000r／min离心5min，最后按沉淀的红细胞体积用0.9%氯化钠溶液配成1%红细胞悬液（此步骤可用老师示范抽取的兔心室血液代替耳缘静脉血液）； 4、 细胞凝集反应 土豆凝集素1滴、1%兔血红细胞悬液1滴，双凹片上混匀，静置20min；以PBS缓冲液加1%血红细胞悬液作为对照，低倍镜下观察 【实验结果】 1、 肉眼观察，对照组中红细胞沉积在双凹片凹槽底部呈大红点；而实验组颜色越来越浅，透明度逐渐增高，最终，背景颜色变为透明，红细胞呈颗粒状聚集 以下是在肉眼下的实验照片（右为对照组，左为实验组） 2、低倍镜中可以看到对照组中红细胞分布均一，无凝集；实验组中红细胞凝集在一起。 以下是在显微镜下观察到的细胞凝集现象： 实验组 对照组 【实验讨论】 从空白对照可以看出，细胞发生凝集时凝集素必不可少的，没有细胞凝集素，细胞几乎不发生凝集。 2、 凝集反映的发生需要一定的时间，在一定程度上，时间越长，实验现象越明显。