禽传染性支气管炎病毒疫苗株H120全基因组序列测定分析.pdfVIP

第十三次学术研讨会会议论文集 禽传染性支气管炎病毒疫苗株H120全基因组序列测定分析 张毅王红宁‘王霆高荣张云飞张安云樊汶樵田浪 四川大学生命科学学院，四川大学“动物疫病与食品安全四川省重点实验室”，四川成都望江路29号610064 其分子特征及系统进化分析。设计18对引物，用RT．PcR方法对mV疫苗株H120的全基因组进行分段扩增、克隆争序 列测定，测定结果表明，H120基因组全长27 列与GenBank 择具有代表性的mvHl20疫苗株进行全基因组测序及序列分析，为对其分子特征及IBv的系统进化分析提供基础． 关奠词禽传染性支气管炎病毒疫苗株H120基因组序列分析 禽传染性支气管炎(IB)，是由禽传染性支气管炎病毒(mV)引起的一种急性、高度接触性传染病， 以呼吸道症状、蛋鸡产蛋量下降、蛋品质下降、肾脏病变及胃肠道病变为主要特征【lJ。IBv血清型复 杂，不同血清型间缺乏有效的交叉保护，并且新的变异株不断出现，造成免疫失败，导致IB的不断 爆发叫】。在规模化饲养条件下，禽传染性支气管炎感染率更高，该病发病率100％，死亡率10～30％， 国内每年造成的经济损失超过十亿元瞄剖。 H120株是最早应用于预防IB的弱毒疫苗。1956年Bijlenga【7J首次在荷兰分离出一株IBv，四年后将该 病毒经鸡胚传代52代次后制作疫苗，这个疫苗就是H52疫苗。然而H52疫苗对雏鸡毒力太强，Hoel【s仃a1 等将其重新传代120次时，证实毒力大大减弱，这个毒株就是H120，其安全性好，毒力稳定，至今 仍在世界范围内广泛应用。本研究选择具有代表性的IBVH120疫苗株进行全基因组测序及序列分 析，为对其分子特征及mV的系统进化分析提供基础。 1材料与方法 1．1 材料 1．1。l毒椽 mV H120株，购自中国兽医药品监察所。 1．1．2菌种，质粒 大肠杆菌DH5伍由四川大学“动物疫病与食品安全四川省重点实验室”保存。载体pMDl9一T购自 TaK根a公司。 1．1．3SPF鸡胚 购自北京梅里亚实验动物中心。 1．1．4试剂 Trizol IIIReVerse RACEkit、 MS，SuperScript TaK出aEX LA Midi Taq、TaKaRaTaq、DNALigationⅪtVer2．0等购自TaK抿a公司。TIANgel Purificalion l(it、M矾研为天根公司产品。 1．2引物合成 用GeIlBallk上所公布的IBV的全基因组序列进行同源性比对，根据IBV 全基因组序列，在保守区用蹦merPremiers5．O软件设计引物，相邻扩增片段之间部分重叠。引物由 上海生工生物工程技术服务有限公司合成。 1．3 病毒培养、收集、RNA提取及RT．PCR扩增 种毒接种于11目龄的SPF鸡胚，弃去24h内死亡的鸡胚，接毒48h后将鸡胚放入4℃冰箱过夜， 行。 1095 禽类传染病禽传染性支气警炎 l』RT-PcⅡ产■克■瓤t蛆质鞋序列测定 用1％琼脂糖凝胶电泳观察扩增结果，并用凝胶回收试剂盒凹收、纯化扩增产物，具体方法参照 反应体系：胶回收产物4 5 J5 uh 5llL，pMDl9．T0uL．DNA“g“o口soludonuL．总体系10 16℃ 反应3h。参照参考文献4 o方法，将连接产物转化大肠杆菌DH5a，用PcR方法进行鉴定阳性克隆， 并将阳性克隆送上海生工进行双向测序。 1．5序列拼美和‘因蛆全序列的生簟信息拳分析 对基因纽序列碱基组成、编码区、转录调控序列等基本特征进行分析。用DNAsTAR中的MegAu蛐 A科EU526388)，Ark99(L10384)，ArkDPHAlx】06624)．BJ(AY31965】) Lx4(AYl89157)，s14(AY64628