检测鹅源新城疫病毒RTPCR方法的建立与应用.pdfVIP

禽类传染病一禽副粘病毒病 麻痹 4 l O O O 0 O 0 O O 5 2 10 死亡 O 9 10 10 lO lO lO 10 10 lO 89 3 267 总和 10 lO 10 lO 10 10 lO 10 10 lO 100 283 IVPI=283／l00=2．83 4小结 本实验从辽宁省新城疫免疫发病鸡群中分离到一株病毒，具有HA特性，且可被ND标准阳性 血清所抑制，不能被禽流感标准阳性血清及减蛋综合症阳性血清抑制，中和试验及动物回归试验确 57．2h、1．89和2．83，属NDV强毒型。 Sota、Clone30 本实验中分离的NDV是引起免疫鸡群发病并导致大批死亡，可见单纯用常规的La 等疫苗免疫产生的抗体水平，已经不能完全对强野毒株提供很好的保护。尽管多年来，众多报道都 证明NDV只有一个血清型，过去人们一致认为新城疫的抗原性保守，不易发生变异，但近年来，有 关新城疫弱毒株变为强毒株【4】，高水平抗体鸡群感染发病和各种免疫失败的情况及非典型新城疫时 常发生【56J，说明新城疫病毒抗原或毒力的变异确有不同程度的存在H省J。这可能是导致目前各地在免 疫鸡群发生新城疫的很重要的原因，这也意味着我国新城疫流行毒株致病力、流行趋势、流行规律 的复杂性。现在，很多地区采用当地分离株制备灭活疫苗来控制当地ND的流行和发生18’91。 ND目前没有特效药物治疗，只能以预防为主。因此养殖户应大力开展免疫监测工作，合理制 定免疫程序，保证各次免疫接种获得良好免疫效果，及时判定鸡场是否受到新城疫强毒感染，加强 饲养管理与隔离消毒等，才是防治ND的关键。 ◆考文献(略) ． 检测鹅源新城疫病毒RT-PCR方法的建立与应用 臧琳张璐宋德武母连志丛彦龙丁壮· (吉林大学畜牧兽医学院，吉林长春130062) 摘要本实验根据GeIIBaIll【上鹅源新城疫病毒NA．1株M基因的序列，在保守区域设计并合成了1对引物，随后 从病毒尿囊液中分离出病毒RNA，进行RT．PcR反应的建立与优化。对优化后的RT．PCR反应体系，分别以猪源新 城疫病毒、新城疫病毒F48E9株、禽流感病毒的反转录产物cDNA和小鹩瘟病毒、鹅腺病毒的DNA为模板进行特 异性检测，并将鹅源新城疫病毒10倍梯度稀释后进行R■PcR的敏感性检测。特异性检测表明只有NA．1株出现特 异条带，敏感性表明NA．1株稀释至10’4时，可以检测到明显的特异性条带，稀释至1 0．5时特异性条带比较模糊，稀 释至lO由时无特异性条带产生。 关奠词 鹅源新城疫病毒；RT．PcR：检测 近年来，由于我国鹅群广泛发生ND，且具有很高的发病率和死亡率，从而改变了NDv对水禽 不致病的的观点。如今，鹅源新城疫已经是现代集约化养鹅业的主要疫病之一【6】。鹅源新城疫病毒 为有囊膜的单股负链l蝌A病毒，包括6个基因，3’一NP．P—M—F_删．L．5’，分别编码核衣蛋白 (Nucleocapsid protein，M)、融合 蛋白(Fusion protein，F)、血凝素一神经氨酸酶蚩白(Hemagglutinin—neuraIlliniprotein，HN)和大 蛋白(La略epolymer嬲eprotejn，L)等6个主要多肽。因为融合蛋白(F)在致病和免疫应答过程中 起重要作用，所以己成为研究鹅源新城疫致病性的热点【7】，已报道的围绕F基因所研发的检测鹅源 新城疫病毒的方法就有‘‘F基因的原核表达及间接ELISA诊断方法MJ’、“复合RT．PCR—j，’、“核酸探针 检测方法IIuJ”等。但是亦有研究显示，M与F有密切的关系，M突变株不能将F组装进入病毒粒子， 也就不能形成有感染性的病毒。M有多种功能，除构成病毒脂质囊膜内面支撑物和在病毒的装配过 程中发挥重要作用外，还调节病毒RNA的合成。由于其高度保真性，有的学者根据该基因变异程度 将NDV划分为两个群。M基因可作为诊断