广西猪戊型肝炎分子流行病学调查及基因型分析.pdfVIP

人兽共患病一病毒病 广西猪戊型肝炎分子流行病学调查及基因型分析 秦毅斌1·2 赵武2’肖爱欢1·2李斌2梁家幸2刘芳1何颖2 梁保忠2姚瑞英2黄安国2蒋玉雯2黄伟坚1’ (1广西大学动物科学技术学院，广西南宁530005；2广西兽医研究所，广西南宁530001) 摘要 戊型肝炎病毒(阳!v)是导致人急性肝炎的主要病原之一，它还可以感染多种动物，且大多都不出现，临床 症状。猪是HEv传播过程中的重要的储存器。本研究选取广西不同地方的25个猪场的294份3月龄左右的猪粪便 以及采集市场销售的90份猪肝脏，用RT．nPCR方法检测了HEVRNA，调查广西猪戊型肝炎的流行情况。结果，在 13l份粪便可检测到HEvRNA，阳性率为44．6％；被检的25个猪场中存在HEv的有18个场，猪场阳性率为72．O％； 遗传进化分析表明，获得所有毒株都属于基因Ⅳ型。 关麓词猪；戊型肝炎；流行病学；基因型 戊型肝炎是由戊型肝炎病毒(HEV)引起的主要通过消化道感染的急性病毒性肝炎，主要通过粪 口途径传播。戊型肝炎主要侵害青壮年，戊肝患者的病死率为1％一2％，较其他各型肝炎高，孕妇的 戊型肝炎死亡率高达20％以上。戊型肝炎是一种潜在的人畜共患传染病，多种动物体内可检测到HEv 抗体或RNA：日本现已报道多起食用HEV污染的未煮熟的肉制品发生感染的病例。目前，戊肝被 世界卫生组织认为是发展中国家的一个重要公共卫生问题。 HEV为无囊膜的单股正链RNA病毒，是戊型肝炎病毒科戊型肝炎病毒属的唯一成员：基因组 长约7．2Kb，含有3个部分霞叠的开放阅读框(openreadingframe，ORFs)。自病毒基凶组的5’末端到 或更多的腺嘌吟核苷酸组成的多聚腺苷酸尾(polyA)。oRFl编码一个非结构聚蛋向，生成与病毒复 制相关的甲基转移酶、木瓜蛋白酶样半胱氨酸蛋白酶、RNA解旋酶及RNA依赖的RNA聚合酶等； ORF2编码的结构蛋白具有典型的病毒衣壳蛋白特征；oRF3编码的磷酸化非结构蛋白，其功能尚不 清楚。 根据序列分析，眦V分为4个主要的基因型：(1)基因I型，即哑洲．非洲型，流行于亚非多数国 家，以缅甸株原型为代表；(2)基因Ⅱ型，即墨西哥型，代表株为墨西哥株、尼日利亚株和新近在纳 米比亚发现的二株；(3)基冈III型，即美国型，包括美国株USl、US2和美国猪眦v分离株，分布 最为广泛，美洲、欧洲、亚洲及大洋洲多个国家均有报道；(4)基因Ⅳ型，即中国基因型，包括中国、 印度、越南、中国台湾和日本等亚洲国家分离的HEV毒株。基因I型和Ⅱ型髓v以感染人为主， 基因III型和Ⅳ型可感染人和多种动物。我国人群感染的HEV有I基因型和Ⅳ型，且以Ⅳ型占优势； 我国猪群中广泛流行基因Ⅳ犁的HEV，III型的报道仅有一例。 为了解广西地区猪源戊型肝炎的流行情况，本研究采用RT-nPcR方法对广西各地二十多个猪场 进行了调查，了解了广西猪群HEV的感染情况及流行基因型。 1材料与方法 1．1材料 1．1．1标本 于2008年11月～2009年4月间采集南宁、柳州、桂林、贺州、贵港、玉林、崇左、钦州、百 色等广西不同市县的规模化养猪场3月龄左右的新鲜猪粪便，采集市场上销售的新鲜猪肝脏和广西 各地送本实验室剖检猪的肝脏。 1．1．2引物 参考已发表在NCBI上的四种基因型的艇V毒株基因组全序列，在oI强一2基因内的保守区设 基金项目：广西基本科研业务费专项课题(桂兽研专项08-3) 作者简介：秦毅斌(1983一)，男，广西桂林人，硕士研究生；E．majl：qinyibin5188@163．com zllaowul68866@163．com 1358 第十三次学术研讨会会议论文集 AAYCAAGGH TTR TGGCG一3’，HEv-B5’一TGYTGGTCRTARTCCTG一3’，HEV二C5’．ACYTCH GGBGTBGCKGAGGA一3’，HEV．D5’一GCTCGCCATTGGCTGAGAC．3’。 1．13蓑体与菌株 DH5Q菌株，由本实验室保存。 pMDl8．TV＆tor，为毗出a公司产品。E．con 1．1．4分子生物学试荆 1尉zol和dNrP(各10rnJⅥo儿)