中性电解水对犬马拉色菌影响的观察.pdfVIP

OFSMAIt．ANIMAt_MEDICINETHE ～气V 会兽医外科学分会第十六次学术研讨会 中性电解水对犬马拉色茵影响的观察 魏娜刘春辉杨蕾张亦驰林德贵’ (中国农业大学动物医学院临床医学系，北京100193) 在动物体表，消化道，皮肤黏膜等处存在大量的正常马拉色菌菌群，动物体表马拉色菌分布以耳内 最高。当耳道内止常生态平衡被打破时，存在于该部位的马拉色菌就会侵入受损组织并增殖引起感染以 致发展为犬外耳炎。犬外耳炎疾病虽然不能危及生命但对宠物生活质量有很大影响。 Innovative 本次实验主要研究由Oculus Sciences开发出的中性电解水对马拉色菌的影响。此次药敏 试验主要从中性电解水抑制乌拉色菌数量、影响马拉色菌菌落形态、影响马拉色菌孢子形态结构等三方 面来检验中性电解水对马拉色菌的影响效果。从三方面结果来看，中性电解水可以非常有效的抑制马拉 色菌数量，对马拉色菌菌落形态影响效果明显，电镜下观察中性电解水作用过的马拉色菌孢子细胞壁破 裂，细胞内容物结构破坏。 1 实验材料与实验方法 1．1 材料 Leeming培养基，瑞氏染液，扫描电镜，透射电镜，显微镜。 1．2 菌种采集2009年4月-5月期间来中国农大动物医院就诊的患有外耳炎疾病的患犬的耳道 分泌物，在Leeming培养基上分离培养，瑞氏染色镜下观察鉴定出马拉色菌菌种。 1．3方法在试验过程中采用灭菌的生理盐水与中性电解水做对比试验，用灭菌PBS液做空白对 照试验。主要实验方法足定量的倍比稀释方法检测药物对马拉色菌数量的抑制效果。另外，观察药物作 用后马拉色菌菌落和马拉色菌孢子的形态结构的变化。 1)中性电解水对马拉色菌数量抑制效果试验：选取鉴定后的马拉色菌，用lml的生理盐水制成菌 的生长情况。再取等量的上述菌液用生理盐水做相同的倍比稀释，并按相同的方法在相同条件下培养， 做对照观察。 另外，考虑到真菌的易扩散会产生误差，所以按相同的方法倍比稀释后，将不同浓度的菌液接种在 不同的Leeming培养基上相同条件下培养，48小时后统计各培养基上马拉色菌的数量。 2)中性电解水对马拉色菌菌落形态的影响：选取三个纯培养后生长良好的马拉色菌单菌落，用刀 片将这三个单菌落连fJ培养基一起切下后放置于一新的培养基内，用记号笔在培养基底部分别标记这三 个菌落PBS，药水，生理盐水。肉眼观察这三个菌落的形态，颜色及质地并拍照记录。之后分别滴加两 滴PBS液，生理盐水，中性电解水于标记过的相应菌落上，放置于室温下。每隔12小时观察一次，并 拍照记录，再滴加。以此做对照观察中性电解水对马拉色菌菌落形态的影响。 3)中性电解水对马拉色菌孢子形态的影响：选取纯培养后生长良好的马拉色菌，用接种环挑取两 份马拉色菌分别将其加入盛有lmlPBS缓冲液和中性电解水的2个小试管中，并用加样枪将其吹吸均匀 制成菌体细胞悬液。作用15min后按扫描电镜和透射电镜制样的常规方法进行样本制备。之后用扫描电 镜和透射电镜观察马拉色菌孢子形态结构的变化。 2实验结果 2．1 马拉色茵分离培养、鉴定结果 Z盈 黄色的酵母样菌落，菌落直径平均为3—5ram，表∞1光『甘或粗糙，边缘有隆起的皱杆，质地柔软或松 脆。7d后苗落连渐变大，颜色变黄，7—14d菌落‘p长速度虽快，之后生K谜度逐渐变慢，颜色变成幸}5 黄色。光镜下观察Leeming培养基t马拉色菌单蔺落，可见培养一周左右的苗落早脯平小透明状．表咖 光滑或I}l糙，呈纽扣形，边缘粗糙不整齐培养一周以J．的屿拉色苗，从前落的中心向四周有小同层次 的辐射状的兰刺样物。 2)光镜下观察马托色蒲形态特征：选取纯培养后的·6拉色莳林片，经瑞几染乜}上染色后．在100 倍钳『镜下观察nr见花生样、卵吲形、球形或咧柱形厚嶝抱子．抱子血径2—69in．易于聚集成簇，偶自； 可见极细小延K的芽体。抱子衅扳出芽及合轴出芽小K，芽颈成领嘟样站}Ij。 2 2中性电解水对马扛色茵药蛙作用结果 22I 巾性电解水对马拉色苗数量抑制效槊 I)37℃温箱巾培养48小时后，可观察到在接种有马拉色菌朦液和用tI，性JU解水