重楼总皂苷与5-FU对胃癌细胞的体外协同作用研究.docVIP

精品论文 参考文献 重楼总皂苷与5-FU对胃癌细胞的体外协同作用研究 吴夏慧 　　（江苏省中西医结合医院 江苏南京210028） 　　【摘要】目的 探讨重楼总皂苷与5-FU对人胃低分化腺癌BGC823细胞体外协同作用及机制。方法 采用MTT法、流式细胞术检测重楼总皂苷与5-FU单独及联合用药对BGC823细胞抑制增殖和促凋亡的影响。结果 重楼总皂苷联合5-FU对胃癌细胞的抑制增殖和诱导凋亡作用优于各单药组。结论 重楼总皂苷联合5-FU具有协同抗肿瘤作用，诱导细胞凋亡可能是其协同作用机制之一。 　　【关键词】重楼总皂苷 5-氟尿嘧啶 胃癌 协同作用 细胞凋亡 　　【中图分类号】R453 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）23-0210-02 　　当前胃癌的化疗以氟尿嘧啶类药物为基础，治疗中存在毒副反应大、耐药等问题。本实验采用MTT法和流式细胞术研究重楼总皂苷与5-FU对胃癌细胞体外协同抗肿瘤作用，从而提供重楼总皂苷联合5-FU临床应用的理论依据。 　　1 材料和方法 　　1.1材料 重楼（重庆重楼中药饮片厂有限公司，批号100401）、5-FU(上海旭东海普药业有限公司，批号101106)、MTT (Sigma公司)、细胞凋亡检测试剂盒 (北京四正柏生物科技有限公司)、自动酶标读数仪（BioTek公司）、流式细胞仪（Becton Dickinson公司）等。 　　1.2 方法 　　1.2.1重楼总皂苷的制备 采用80%乙醇热回流提取3次，滤液减压回收真空干燥制得重楼醇提物。重楼醇提物上样于D101型大孔吸附树脂，用纯水、40%乙醇、70%乙醇、90%乙醇顺序洗脱，70%乙醇部位滤液减压回收真空干燥制得重楼总皂苷。 　　1.2.2 MTT法测定细胞增殖抑制作用 BGC823细胞以6.0times;103/孔密度接种于96孔板，培养24h，加入各组药物，重楼总皂苷组浓度为4.0、3.0、2.0、1.5、1.0mu;g/mL；5-FU组浓度为100.00、50.00、25.00、12.50、6.25mu;g/mL；联合用药组浓度为4.0+100.00、3.0+50.00、2.0+25.00、1.5+12.5、1.0+6.25mu;g/mL，同时设不加药物的空白对照组。培养48h，每孔加20?l MTT，培养4h后弃培养液，加150?lDMSO，570/630nm波长下全自动酶标仪测定吸光度值。 　　1.2.3 流式细胞术测定细胞凋亡作用 BGC823细胞以2.5times;105/孔密度接???于6孔板中，培养24h，分别加入重楼总皂苷(2mu;g/mL)、5-FU(25mu;g/mL)、重楼总皂苷+5-FU(2+25mu;g/mL)，同时设不加药对照组。培养48h，胰酶消化收集细胞后PBS洗2次，加100mu;l结合缓冲液重悬细胞，加Annexin V-FITC 10mu;l、PI 5mu;l，混匀避光孵育15min，加400mu;lPBS，流式细胞仪检测分析细胞凋亡率。 　　1.2.4 统计分析 SPSS17.0统计软件进行处理，数据统计采用t检验，数据均用x-plusmn;s表示。 　　2 结果 　　2.1 重楼总皂苷联合5-FU对BCG823增殖的影响 重楼总皂苷、5-FU单用和联合对BGC823细胞生长抑制率分别为13.93plusmn;1.11、25.58plusmn;0.78、39.72plusmn;1.24、53.68plusmn;1.60、70.09plusmn;0.85；19.48plusmn;2.62、30.40plusmn;0.69、41.13plusmn;1.23、57.02plusmn;1.59、68.97plusmn;2.31；30.70plusmn;1.79、48.38plusmn;1.82、64.43plusmn;0.78、79.92plusmn;0.65、90.72plusmn;0.79。重楼总皂苷、5-FU单用与联合对BGC823细胞生长抑制效应随着药物浓度增加而增强。采用Webb系数法[1]判定重楼总皂苷与5-FU的相互作用，在各浓度范围内，联合应用时实际抑制率均大于预估效应，即产生协同作用。 　　2.2 重楼总皂苷联合5-FU对BGC823细胞凋亡的影响 空白对照组、重楼总皂苷组、5-FU??、联合组作用BGC823细胞48h，凋亡细胞所占比例分别为 6.3%、16.8%、16.1%、61.9%。联合应用时早期凋亡和中晚期凋亡细胞比例增多，产生诱导BGC-823细胞凋亡的协同效应。 　　3 讨论 　　中药重楼具有清热解毒、消肿止痛等功效，用于治疗疔疮痈肿