酶联免疫法检测血清丙肝抗体假阳性的临床分析.docVIP

精品论文 参考文献 酶联免疫法检测血清丙肝抗体假阳性的临床分析 邓细球 刘月玫 　　（广东省中山市南朗医院检验科 528451） 　　【摘要】 目的：分析酶联免疫法（ELISA）检测血清丙肝抗体（HCV-Ab）假阳性的原因，探讨有效的解决对策。方法：回顾性分析我院60例用ELISA法检测的血清丙肝抗体阳性血清标本，然后采用聚合酶链反应（PCR）方法进行确证试验，以明确假阳性标本，分析影响ELISA法出现假阳性的因素。结果：采用ELISA法检测血清丙肝抗体阳性的60份血清标本经PCR检测依然发现为阳性49例， ELISA法检测真阳性率为80.2%，假阳性率为19.8%。两种检测方法在血清丙肝抗体阳性检出率方面的差异有统计学意义（Plt;0.05）。结论：影响ELISA法检测血清丙肝抗体结果假阳性的因素较多，检验人员应规范操作，避免不利因素，降低假阳性率，对于怀疑假阳性的血清标本应及时的进行HCV-RNA检测。 　　【关键词】 酶联免疫法；血清丙肝抗体；假阳性 　　【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）30-0072-02 　　丙型肝炎（HepatitisC）是由丙型肝炎病毒（HCV）感染引起的一种传染性疾病，随着病情的进展可发展为肝硬化，甚至肝癌，严重威胁到了患者的生命健康。目前临床上把检测血清丙肝抗体（HCV-Ab）做为诊断丙肝的重要依据，酶联免疫法（ELISA）是目前临床检测血清丙肝抗体的主要方法，该检测方法灵敏度高，特异性强，因此在临床得到了广泛应用[1]。但ELISA法在检测血清丙肝抗体时也存在假阳性问题，本文将分析ELISA法检测血清丙肝抗体假阳性的原因，并探讨有效的解决对策。 　　1.资料与方法 　　1.1 一般资料 　　选取我院2013年1月至2015年6月60例用ELISA法检测的血清丙肝抗体阳性血清标本，所有血清标本均来自我院住院及门诊收治的患者。 　　1.2 检测方法 　　酶联免疫法采用全自动酶联免疫检测仪，抽取患者清晨空腹静脉血3～5ml，离心分离血清后1～2h采用ELISA法检测血清中的丙肝抗体，试剂由北京万泰生物技术有限公司提供，严格按照说明书进行操作。对ELISA法检测结果均为阳性的血清标本再次行聚合酶链反应（PCR）检测方法进行确证试验，使用美国ABI7500实时荧光定量PCR扩增仪，检测血清HCV-RNA，试剂由上海科华生物技术有限公司提供，严格按照说明书进行操作，以明确假阳性。 　　1.3 统计学处理 　　采用SPSS16.0软件对数据进行统计分析，计数资料用率（%）表示，采用x2检验，以Plt;0.05为差异有统计学意义。 　　2.结果 　　采用ELISA法检测血清丙肝抗体阳性的60份血清标本经PCR检测依然发现为阳性49例，阴性11例，ELISA法检测真阳性率为80.2%，假阳性率为19.8%。两种检测方法在血清丙肝抗体阳性检出率方面的差异有统计学意义（Plt;0.05）。 　　3.讨论 　　ELISA法检测血清丙肝抗体具有快速简便、特异性强、灵敏度高、早期测出抗体等优点，因此对于临床诊断丙型肝炎具有重要的意义。ELISA试剂盒所用包被抗原为合成多肽抗原和基因工程抗原，将血清加入已包被抗原的反应孔内孵育，若标本中含有抗-HCV抗体，则该抗体与微孔内抗原形成抗原抗体复合物，加入酶结合物后酶结合物连接至抗原抗体复合物上，在TMB底物参与反应的情况下会产生显色反应[2]。当所检测样本吸光度值大于cottoff值5倍时判断为阳性，当吸光度值介于cottoff值3.8～5倍之间时，化学发光试验如果为阳性则判断为阳性[3]。当所检测样本吸光度值小于cottoff值时可判定为阴性。 　　虽然目前ELISA法检测血清丙肝抗体的临床应用较为广泛，但也存在着检验结果假阳性的问题，因此值得临床关注，以进一步分析原因，探讨有效的解决对策。影响ELISA法检测血清丙肝抗体结果假阳性的因素较多，主要可为标本内物质干扰以及检验过程中的操作因素。标本中的干扰物质主要包括类风湿因子、补体、非特异免疫球蛋白、异嗜性抗体、某些自身抗体等。高免疫球蛋白血症患者血清中存在浓度相对较高的非特异性IGG，因此检验结果可能会出现假阳性。检验过程中的操作因素对于假阳性结果也会产生一定的影响，标本溶血、细菌污染、标本凝固不全，试剂盒抗原不纯也容易使得检验结果出现假阳性[4]。标本加样时间过长，可能使加样后在恒温箱的等待时间相对过长，使得检测结果为阳性。检验过程中使用的洗板针被堵塞，抽吸不充分，或洗板机内洗液量不足也可能导致假阳性[5]。 　　此外ELISA法检测血清丙肝抗体假阳性还会受到加样、反应温度、反应时间、洗涤