酶联免疫法测定丙肝抗体的评价.docVIP

精品论文 参考文献 酶联免疫法测定丙肝抗体的评价 王礅(内蒙古巴彦淖尔市临河区人民医院检验科 015000) 　　【摘要】目的：探讨酶联免疫法（ELISA）方法检测丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）抗体优缺点并分析其产生的原因。方法：对我院临床样本进行ELISA、金标法、微粒子法（MEIA）检测，并辅以HCV RNA确认实验，对所获结果进行分析。结论：相比之下，ELISA法较其他方法检测血清标本中抗-HCV的相符率无差异（Pgt;0.05），但存在一定的假阳性率。操作过程发现，ELISA法过程较繁琐，花费相对较高，但考虑综合因素，ELISA法是最佳的检测抗-HCV方法。 　　【关键词】酶联免疫法 ELISA 丙肝抗体 评价 　　【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2014）11-0147-02 　　丙肝由丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）感染引起，主要经性传播、母婴传播、血液传播感染。据世界卫生组织统计，全球HCV感染率约为3.12%，呈全国流行性，我国丙肝感染率较高，阳性率约为3.19%。丙肝可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化[1]，对患者的健康和生命危害极大，目前尚无特殊的预防和治疗方法，控制HCV的最有效的途径之一就是早发现早治疗，故选用特异性好、灵敏度高的检测方法显得极为重要。目前，酶联免疫吸附法（ELISA）是临床常用的检测抗-HCV方法，因其过程简单、迅速、快捷的特点被接受。 　　1.材料与方法 　　1.1 材料 　　样本来自我院疑似丙肝患者体检化验310例。试剂金标检测卡购自潍坊康华药业有限公司；ELISA试剂盒购自上海科华生物工程科技有限公司；MEIA为AXSYM型自动免疫分析系统及其配套试剂，购自美国Abbott公司。丙肝病毒RNA PCR检测试剂盒购自中山大学达安基因股份有限公司。所有试剂均经过卫生部生物制品检定所批批检，并均在有效期内。 　　1.2 方法 　　取材无菌采取外周静脉血约4ml，3000rpm离心8min，取血清，立即检测丙肝抗体和丙肝核心抗原。 　　1.3 仪器 TENCAN酶标仪。 　　1.4 方法操作详见说明书。 　　1.5 数据处理运用SPSS13.0统计软件进行chi;2检验。 　　2.结果 　　检测结果表明，经过抗-HCV RNA确认，在疑似丙肝检测者血清中，丙肝阳性率为63.55%。MEIA法检测阳性率为66.45%，与确认结果相符率为97.10%，假阳性率为4.37%；金标法检测阳性率为59.35%，与确认结果相符率为95.80%，假阴性率为6.60%；ELISA法检测阳性率为61.93%，与确认结果相符率为98.38%假阴性率为2.54%；ELISA检测相符率高于其他两组，但无显著差异（Pgt;0.05）；相比之下，MEIA法存在较高假阳性率，金标法存在较高的假阴性率（见表1）。 　　表1 检测310例体检者血清的结果 　　3.讨论 　　丙型肝炎大部分都是预后不良，很大机会发展为慢性肝炎，甚至发展成肝硬化或者肝癌。如果误诊、漏诊，后果可想而知。早发现早治疗可控制肝炎的发展程度，降低传播的可能性，所以选择一个灵敏度高、特异性高，可以准确及时检测出HCV病毒的方法很重要。 　　HCV RNA检测的HCV感染窗口期月为7-14天，是检测HCV复制、HCV感染确诊和评估丙肝病毒复制率直接指标，故以其作为参照具有很重要的临床意义。本研究显示，MEIA法检测出阳性率最高，与确认结果相比，具有较高的假阳性率，可能因其采用的双抗原夹心法能够检测到多种类型抗体或者产生非特异性结合的缘故。金标法检测出的阳性率较低，与确认结果相比，相符率较低，假阴性率较高，可能金标记技术包被抗原板的吸附量、对抗原决定簇位点的充分暴露等因素干扰实验灵敏度的结果，加之，此法反应时间较短，也降低了实验的灵敏度。相比之下，ELISA法与确认结果相比，虽可能由于标本内物质或者操作原因产生非特异性反应干扰而导致假阴性率，但偏差较小，相符率很高，可作为最佳检测抗-HCV方法[2]。 　　目前，ELISA法检测抗-HCV是临床实验室常用方法，采用抗-HCV与抗-HCV抗体产生特异性反应将抗-HCV与辣根过氧化物酶（HRP）连接，通过HRP与底物产生颜色反应，颜色深浅与抗-HCV含量成正比，并可用肉眼或电子显微镜或者光学显微镜测定，方法简单、迅速、快捷。但操作过程耗时较长，操作步骤相比其他方法较多，稍有不慎便造成假阴性，如ELISA法包被的多肽结构片段抗原的非高度特异性及血清反应素的特异性影响；包被的方法可能会影响