酶联免疫试剂盒检测的改进.docVIP

精品论文 参考文献 酶联免疫试剂盒检测的改进 王诺 耿红 黄晶 　　（中南民族大学生命科学学院 湖北武汉 430074） 　　【摘要】酶联免疫试剂盒是用于检测人或动物在疫苗注射后对机体是否产生效果的手段之一，它具有检测数量大、稳定性高、单价低廉等优点。但是，同时它也有检测时间长、检测步骤复杂、保存条件要求高等缺点。本实验室在综合考虑酶联免疫试剂盒的各项优缺点之后，对检测人体的几种酶联免疫试剂盒从其硬件设备、反应条件、试剂成分等各方面入手，对其检测进行改进，以期为酶联免疫试剂盒检测降低成本、节约时间、简化操作、提高检测率作出一些贡献。 　　【关键词】酶联免疫 ELISA 疫苗检测 改进 　　【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）13-0025-02 　　人体或动物在注射疫苗之后，是否产???了相应的抗体是衡量疫苗是否生效的重要指标。其检测手段主要有酶联免疫法和胶体金试纸条法。胶体金试纸条法相比于酶联免疫试剂盒法具有快捷、准确、方便等优点，但是也有单价昂贵、单次检测数量少、稳定性差等劣势。酶联免疫试剂盒又叫ELISA试剂盒，是通过抗原抗体的特异性反应来吸附血清中可能由于注射疫苗而已经产生的抗体并在关联酶的催化下使加入的显色剂显色，从而检测出之前注射的疫苗是否有效。通常一个试剂盒可以检测93人份的血清，具有检测数量大，单价低廉等优点。 　　1 ELISA试剂盒检测血样基本原理及步骤 　　通常情况下，已注射疫苗的患者会在一个月后前往当地疾控站抽取末梢血做疫苗效果检测。采集的血样放置在采血液中处在4度冷藏保存，待实验室检测之前再置于室温下平衡半小时。一般93人份的血清一同使用样品稀释液稀释100倍之后，按顺序加入96孔包被板中，与包被板内含的病毒抗原在37度反应一段时间，之后洗涤包被板使其中非抗体物质与板体分离，再加入酶标记的二抗，反应后结合在包被板上。最后加入显色底物在酶的催化之下反应，显出颜色[1]。由于酶量与血清中抗体的量呈现一定的比例，它在一定时间内催化显色剂显色将会形成不同的颜色深浅，与试剂盒自带的阳性抗体对照同步显色对比之后定量的分析出血清中的抗体含量，从而判断之前注射的疫苗是否已经产生作用。 　　2 ELISA试剂盒检测改进的结果与讨论 　　使用ELISA试剂盒检测抗体的优势在于它的单次检测数量大、长时间放置后稳定性高，但是它也有检测时间长、检测工序复杂、易溶血出现假阳性等缺点[2]。因此，本实验室从这几方面入手，改进了若干流程，简化了步骤，以期提高检测效率，降低劳动成本。 　　2.1采血设备的改进 通常疾控站使用采血针采集患者末梢血之后放入具编号的离心管保存，不仅放置时容易分散或拿错，而且检测时不方便摇匀和加样。本实验室使用实用新型专利采血盒，盒体具有对应包被板的8排12列共计96孔，孔间距能配合12头长排型移液枪一次性吸取一排12孔的血清，每一排的小孔设计有一条12个连在一起的塑料孔帽。每次采血时，护士可现场每取完12人次的血样即盖上一条孔帽防止已采血样的溅射和污染。在血清运输的过程中，每93人份的血液样品保存于一个方形采血盒内，多个采血盒可以整齐码放堆叠，不会出现散乱和颠倒。在实验室检测前，可轻微颠倒采血盒2次混匀93人的血样，随后拉开8条塑料孔帽，用12头排枪分8次取血样，分别注入对应的96空包被板孔内。 另外，采血之前已将计算好的一定量的样品稀释液置于采血盒的每个孔之中，采血同时进行了现场血清样品的稀释，这样做一者省去了实验室再次专门去稀释样品的步骤，二者样稀添加物能保护血清，较保存在离心管中的纯血清能更长时间的运输而不变质，也能有效地防止溶血情况的发生，减少假阳性的出现[3]。溶血是指采集的血液中红细胞破裂，血红蛋白从细胞内逸出，与采血液混合的现象。发生溶血的血样发黑，检测结果将为假阳性，造成对应患者的真实检测结果不明。由于血样的运输条件限制，搬运过程中的摇晃，溶血现象在试剂盒检测之前就已经经常的出现。而使用新型采血盒之后，溶血现象大大降低，这一者是由于采血盒的规模固定了采血的痕量，使得血样相比于采血液要小得多，外部的震动通过采血液的缓冲作用对包裹在内的血样影响减小；二者是由于样品稀释液的直接保护，使稀释100倍后的血样中红血球细胞膜在样稀的保护下很少与其他物质发生碰撞，甚至直接被保护基团包裹，难以破裂。 　　2.2反应时间及条件的改进 在酶联免疫试剂盒检测的过程中，有两个步骤十分的关键。一个是，血清中抗体与包被板抗原的反应，另一个是酶联抗体与抗原抗体复合物的反应。通常在检测过程中，这两步反应都要在37度的水浴锅中温浴半小时。其中，第一步反