植物生物学实验课件种子发芽率的快速测定.pptVIP

植物生物学实验 种子发芽率的快速测定 目的要求 掌握快速测定种子发芽率的 氯化三苯四氮唑法、溴麝香 草酚蓝法和红墨水染色法。 了解以上三种方法的优缺点。 实验原理 试剂和器材 材料：玉米、小麦种子。 试剂：0.5%TTC溶液，1%BTB琼脂 凝胶，红墨水。 器材：恒温箱，烧杯，培养皿， 镊子，刀片，天平，漏斗，  滤纸。 操作方法 思考题 1.为什么在要将待测种子放在温水中浸泡一段时间？ 2.用三种方法快速测定种子发芽率所得到的结果一致吗，比较这三种方法的优缺点。 * * 　　种子发芽率是指在最适宜条件下，在规定天数内，发芽的种子占供试种子的百分数。它是决定种子品质和实用价值大小的主要依据，与播种时的用种量直接有关。　 　　凡有生命活力的种子胚部，在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生命活力的种胚则无此反应。当TTC渗入种胚的活细胞内并被还原时，便由无色的TTC变为红色的TTF。 ——氯化三苯四氮唑法 　　凡活细胞必有呼吸作用，吸收空气中的O2，放出CO2。CO2溶于水而成为H2CO3，H2CO3解离成H+和HCO3-，使得种胚周围环境的酸度增加，可用溴麝香草酚蓝(BTB)来测定酸度的改变。BTB的变色范围为pH6.0-7.6，酸性呈黄色，碱性呈蓝色，中间经过绿色(变色点为pH7.1)。 ——溴麝香草酚蓝法 　　凡生活细胞的原生质膜具有选择性吸收物质的能力，而死的种胚细胞原生质膜丧失这种能力，于是染料便能进入死细胞而染色。 ——红墨水染色法 1.浸种将待测种子在30-35℃温水中浸种。 2.显色取吸胀的种子100粒，用刀片沿种子胚的中心线纵切为二半，将其中的一半培养皿中，加入适量的0.5%TTC，以覆盖种子为度。然后置于30℃恒温箱中0.5-1小时。观察结果，凡胚 被染为红色的是活种子。 将另外一半纵切开的种子置于另一培养皿中，加入5%红墨水，以淹没种子为度，染色10-15分钟。染色后倒去红墨水，用水冲洗多次，至冲洗液无色为止。凡种胚不着色或着色很浅的为活种子；凡种胚与胚乳着色程度相同的为死种子。 另取吸胀的种子100粒，将其整齐地埋于准备好的琼脂凝胶培养皿中，种子平放，间隔距离至少1cm。然后将培养皿置于30-35 ℃下培养2-4小时，在蓝色背景下观察，如种胚附近呈现较深黄色晕圈是活种子，否则是死种子。 3.计算计算活种子的百分率(种子发芽率)。