分子生物学课件MB-chapter 5 RNA transcription.ppt

相同或相似点： 1.都需要解开DNA双链； 2.都以DNA为模板； 3.聚合过程都为核苷酸之间形成磷酸二酯键； 4. 链的延伸方向都为5’ 3’； 5. 都遵守碱基配对规律 特点： 1.都以四种三磷酸核苷的底物作为原料: NTP (ATP, UTP, GTP, CTP) 2.都遵循碱基配对原则: A-U，T-A，C-G， 3.RNA链的延长方向都是5’→3’的连续合成。 3.都不需要引物。 4.都缺乏3’→5’外切酶活性，所以没有校正功能。 （1）原核生物启动子 在原核生物的启动子中有4个区域：转录起始点 (I) 、－10区(结合位点B), 、－35区(识别位点R) 、－10与－35之间的序列。 转录起始点 转录起始点在多数情况下为嘌呤，常见的序列为CAT，A为转录起始点。 －10区与－35区间的距离（17bp） －35区和－10区之间的距离在绝大多数原核生物启动子为16到18 bp。该区域的碱基序列并不重要，但该距离的长短是至关重要的。 适宜的距离可以为RNA聚合酶提供合适的空间结构，便于转录的起始。 大肠杆菌启动子共有序列的功能 转录生成的mRNA的序列中能形成茎环或发夹式结构，再后继又转录出一连串U。 茎环或发夹式结构可以阻止RNA聚合酶再继续沿DNA移动，并使聚合酶从DNA链上脱落下来，终止转录 （2） 通读（read through）：在依赖ρ因子的转录终止过程中，RNApol转录了IR序列之后，虽发生一定时间的延宕，但如果没有ρ因子存在，则RNApol会继续转录. 按其对α-鹅膏蕈碱(聚合酶抑制剂)敏感性而分为三种 均由10～12个大小不同的亚基所组成，结构非常复杂，其功能也不同。 (1)Ⅱ型启动子 基本启动子:TATA box 核心元件 起始位点(initiator,Inr):一般由Py2ANA/TPy2构成 CAAT box Ⅱ类启动子 上游元件组成 GC box Oct ． 远端调控区 增强子（enhancer） 静息子（ silencer） 上游激活序列（upstream activating sequences UASs） 一段具有特化染色质结构的区域 可阻断增强子或沉默子对靶基因或启动子的增强或失活作用 保护两个绝缘子之间的基因免受任何外界因子的影响 cDNA：利用反转录酶可合成出与任何RNA模板（mRNA，tRNA或rRNA）的碱基序列互补的DNA－－互补DNA（complementary DNA, cDNA）。 几乎所有真核生物mRNA分子的3 末端都有一段polyA, 当加入寡聚dT作为引物时，mRNA就可作为模板，在反转录酶催化下在体外合成与其互补的cDNA，为研究真核结构基因提供了有效途径。 转录的概念及特点 原核生物的转录（尤其是终止机制） 真核生物的转录（II型） 原核真核生物的启动子 反转录 简述真核RNA聚合酶II的转录起始复合物装配过程和转录起始（15分）2001武大 简述（或绘图说明）真核细胞RNA聚合酶II转录的起始需要哪些基本转录因子及其装配过程（15分） 2002 简述原核生物转录起始与转录终止过程中所涉及的主要蛋白质和核酸结构及其具体作用。（8分） 2003 试比较真核生物RNA聚合酶Ⅱ识别的启动子与原核生物RNA聚合酶所识别的启动子的结构特点，各结构单元的功能是什么？为什么原核生物一种RNA聚合酶能识别不同的结构基因？ 2004 真核细胞mRNA的Ⅱ型RNA聚合酶转录 ，需要Ⅱ型启动子和转录因子TFⅡA ，TFⅡB ，TFⅡD ，TFⅡE 和TFⅡH等 。（1）请设计实验证明这些转录因子和RNA聚合酶Ⅱ结合到启动子的顺序 ；（2）请设计实验证明TFⅡD复合体可以单独准确结合到启动子TATA box上 ；（3）TFⅡD复合体包括哪些蛋白质 ？如果你有其中一个蛋白质的抗体 ，并知道其他几个蛋白质的大小 ，请设计实验验证TFⅡD复合体的组分 。 2007 第二部分 转录后加工Post-transcriptional Processing 加工的三种形式是： ① 减少部分片段：如切除5’端前导序列，3’端尾巴