分子生物学课件MB-10 technology of molecular biology.pdf

第10章 分子生物学技术 Chapter 10 Technology of Molecular Biology 2012/5/1 1 一、概述 DNA重组技术(recombinant DNA technique) 将外源基因（又称目的基因，是一段 DNA 片断）经切割和连接，组合到载体 DNA 分 子中去，再把它转到受体细胞（亦称寄主细 胞）中去，使外源基因在寄主细胞中增值和 表达，从而得到期望的由这个外源基因所编 码的蛋白质。 2012/5/1 2 DNA重组技术 同义概念： • 分子克隆（molecular clone ） • 基因克隆（gene clone ） • 基因操作（gene manipulation ） • 基因工程（gene engineering ） • 遗传工程（genetic engineering ） 2012/5/1 3 程 流 作 操 的 程 工 因 基 2012/5/1 4 所以，基因工程的操作包含以下步骤：  获得目的基因  构造重组DNA 分子 上游  转化或转染  表达  蛋白质产物的分离纯化 下游 2012/5/1 5 基因工程的三大理论发现： 生物的遗传物质是DNA DNA的双螺旋结构和半保留复制机制 遗传密码子的破译 2012/5/1 6 技术上的四大发明  基因的剪刀—— 限制性内切酶  基因的针线——DNA连接酶  基因的车子——载体  逆转录酶 2012/5/1 7  限制性内切酶 • 能识别双链DNA中特定碱基顺序的核酸水解酶 • 大都从原核生物中发现提取的 • 以内切方式水解核酸链中磷酸二酯键 2012/5/1 8 • 分类 I型限制性内切酶： 最早发现 3个亚基：S亚基—识别特定DNA序列；M亚基- 甲 基化；R亚基-限制性内切酶功能。三个亚基组成复合 体，全酶才有活性。 对DNA链的识别、切割位点不同； 无固定切割位点，一般距离识别位点1kb到几个kb 处随机切割 由于切割是随机的，此酶在基因操作中无实际用途 2012/5/1