细菌形态检查.docVIP

实验一 细菌形态检查 【目的】 ①掌握示教显微镜下所看到的细菌形态和特殊结构。 ②掌握细菌涂片制作，革兰染色操作。 ③掌握油镜的使用和保护方法，以便娴熟应用油镜观察细菌形态或结构。 一、显微镜油镜的使用和保护法 (一)显微镜油镜的识别 (1)油镜头上都有标记： ①标有100×或90×；(2)有白、黑或红色圆圈；(3)有“油”或HI、oil字。 ⑵油镜头比其它接物镜长，孔径最小。 (二)显微镜油镜的使用 ①使用显微镜油镜时，勿使镜台倾斜，以免镜油流出。 ②在玻片标本上加香柏油(镜油)一滴，置载物台上，使有标本处对准聚光器中央(如肉眼看不清标本所在位置，应先用低倍镜观察)，用移动器或用固定夹固定。 ③眼睛从物镜侧面注视，右手转动粗调节器，使载物台上升，油镜头慢慢浸入油中，并几乎与玻片接触，但切勿压及玻片，以防损坏油镜头。 ④将聚光器升高，光圈开大，然后眼观镜筒内，两手转动反光镜采光，使视野内光线明亮。若光源为灯光或阴天采自然光时，则使用凹面镜。 ⑤眼观镜筒内，右手持粗调节器，缓慢下降载物台，当看到模糊物象时，再用细调节器调整看清物象。操作时严防油镜头与玻片相撞。 (三)油镜的保护 ①显微镜是贵重精密仪器，使用时要精心保护，不得随意拆散和碰撞。 ②取送显微镜时，右手持镜臂，左手托镜座，平端于胸前，然后轻放于桌面上或柜箱内。 ③油镜用毕，载物台下降，取出标本片，用擦镜纸将油镜上的油擦净，(用擦镜纸蘸二甲苯擦试，再用擦镜纸擦去二甲苯)擦镜时应顺其直径方向擦，不要转圈擦。 ④不用时，将镜头转离聚光器，油镜头朝前呈“八”字形，降下聚光器，对号放入镜箱。标本片按规定擦去镜油，放入标本盒，如该标本片不再使用，则投入消毒缸内。 ⑤防止与强酸、强碱、乙醚、氯仿、酒精等化学药品接触。 (四)油镜加油的原理 由于细菌个体小，必须使用90×或100×的物镜，以保证足够的放大倍数，同时为保证足够的亮度，必须滴加香柏油(因香柏油与玻璃的折光率相近似)，由聚光器出来的光线通过玻璃和镜油，不发生折射，直接进入镜筒，光路见下图所示。 油镜加油的原理 二、细菌不染色标本检查法 【材料】 ①变形杆菌、葡萄球菌(8～12h)肉汤培养物。 ②凹玻片、载玻片、盖玻片、凡士林、接种环、酒精灯。 【方法】 ⑴压滴法 取一张洁净载玻片，用接种环取葡萄球菌和变形杆菌幼龄菌液各2～3环，分别置于玻片二端，加盖玻片，先用低倍镜对光，再用高倍镜观察细菌动力形态。由于不是染色标本，光线宜暗，即降低聚光器，缩小光圈。 ⑵悬滴法 在凹玻片的凹窝周围涂少许凡士林，用接种环取变形杆菌和葡萄球菌菌液，分别置于一盖玻片中央，将凹窝对准盖玻片反扣在盖玻片上，将二者压紧后迅速反转，使菌液悬于盖玻片。静置片刻后，先用低倍镜，再换高倍镜观察。观察时光线不宜过强，适当降低聚光器，缩小光圈，以利观察。 悬滴标本的制作 ⑶暗视野法 ①取下显微镜上原有的明视野聚光器，换装暗视野聚光器；②取2～3环菌液置于载玻片上，加盖玻片(同压滴法)；③在暗视野聚光器上加镜油；④置标本片于载物台上，上升聚光器，使其上面的镜油与载玻片接触；⑤转动反光镜，使光线集中于聚光器上；⑥用低倍镜观察，当视野中有一圆形光环出现时，转动聚光器上的调节螺旋，将光环移至视野中央；⑦换高倍镜观察，用细调节器调节清晰；⑧若用油镜观察，则在盖玻片上加镜油。 【结果】 有鞭毛细菌运动的特点是：有明显的定向运动，从一处泳至另一处（变形杆菌）。 无鞭毛细菌运动的特点是：呈原位的颤动，为环境中液体分子冲击造成（葡萄球菌）。 三、细菌的基本形态观察（绘图） 注意细菌的大小(放大 倍)、形状、排列、染色性。 葡萄球菌 　　　　链球菌　　　　　　　　脑膜炎奈瑟菌　　　　　　大肠埃希菌 白喉棒状杆菌　　　　　　炭疽芽胞梭菌　　　　　　　　霍乱弧菌　　　　　　　幽门螺杆菌 四、细菌的特殊结构观察（绘图） 荚膜 芽胞 鞭毛 肺炎链球菌 　 破伤风芽胞梭菌 伤寒沙门菌 （注意荚膜和菌体） （注意芽胞的形状和位置） （注意鞭毛的位置、数量） 五、细菌涂片的制作 【目的】 细菌材料须涂布固定于玻片上，经染色后才能观察其形态、结构及染色反应。 【原理】 细菌的化学成分以胶体原浆蛋白为主，涂布在玻片上经火焰温热后可固定于玻片，再经染色冲洗即可被染上颜色，且不易被水冲洗掉。 【材料】 葡萄球菌、大肠埃希菌培养物、玻片、生理盐水、接种环、酒精灯、火柴、消毒缸。