实验三 药敏实验.pptVIP

药 敏 实 验 医学微生物学教研室 目的要求 了解药物敏感试验的方法和实际意义 掌握试管稀释法和纸片扩散法的原理、操作方法及结果判读 方 法 试管稀释法 纸片扩散法 试管稀释法 原理 以液体培养基将抗生素作不同浓度的稀释，然后接入待检菌，定量测定抗菌药物对被测菌的最低抑菌浓度（MIC）。 材料 水解酪蛋白（M-H）液体培养基1.9ml×1管、 1ml×9管 葡萄球菌菌液 100U/ml青霉素溶液 移液管2支 菌液准备 将待测菌的单个菌落接种于2毫升MH液体培养基中，37度培养4-5小时，校正浓度，使其相当于0.5麦氏管的浊度。再按1:200稀释后备用。 抗菌药物倍比稀释 培养 置37℃生化培养箱，培养18-24h 注意事项 倍比稀释时最后的1ml弃液不能随意丢弃，注意环境卫生 接种后培养前需加盖试管塞 纸 片 扩 散 法 原理 含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断地向纸片周围区域扩散，形成递减的浓度梯度。在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌的生长被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。 试验程序 材 料 普通琼脂平皿培养基，葡萄球菌12-16小时液体培养物。 含抗生素的干燥滤纸片（直径6mm，每个纸片的药物含量：青霉素 2U/片，链霉素、氯霉素、庆大霉素均为10ug/片）。 涂布棒、镊子、量尺。 操 作 方 法 取琼脂平皿，进行如下操作： 1.标记分区 2.涂布接种 3.贴片 4.培养 5.结果观察 1.标记分区 青 链 庆 氯 反面观 2.涂布接种 3.贴片 链 庆 青 氯 正面观 4.培养 置37℃生化培养箱，倒置培养18-24小时 5.结果观察 抗生素纸片 纸片法抑菌圈直径（单位：mm） 敏感标准 青霉素 （5U/片） 10 抗药 10-20 中度敏感 20 高度敏感 链霉素（10U/片） 10 抗药 10-15 中度敏感 15 高度敏感 氯霉素（10U/片） 10 抗药 10-17 中度敏感 17 高度敏感 庆大霉素（10U/片） 10 抗药 10-15