富集培养的低温纤维素降解细菌菌群结构分析.pdfVIP

糍n纛熊穗城 ． ． Ora Onlinesystem：http：Hwwwjabiotech … gy n■■-_ 婴 星 富集培养的低温纤维素降解细菌菌群结构分析 孟建宇 樊兆阳 李蘅 陶羽 王瑞刚 冯福应 内蒙古农业大学生命科学学院应用与环境微生物研究所，呼和浩特 010018 通讯作者，fengfuying@imau．edu．cn 摘 要 内蒙古大兴安岭森林土壤 中低温纤维素降解菌资源丰富，本研究 旨在分析其菌群结构 。在 1O℃下，用羧 甲基纤维素~(CMC—Na)培养基对样品中的低温纤维素降解菌进行富集传代培养，用3，5一二 硝基水杨酸(DNS)法测定纤维素酶活性，以细菌16SrDNA通用引物(341F和907R)进行V3NV5区域PCR 扩增，以变性梯度凝胶 电泳(DGGE)对PCR产物进行电泳，获得 16SrDNA指纹图谱后分析细菌菌群结 构。研究结果表明，低温富集传代过程中，相对酶活随着培养代数的增加而不断增加，第4代的相对酶活 最高，为30．625IU；每代都有菌种的消失和增加；富集培养液 中包含属于cc．变形菌纲(—Proteobacteria)、B一 变形菌纲(B—Proteobacteria)、Y．变形菌纲(Y—Proteobacteria)、硬壁菌fq(Firmicutes)和拟杆菌fq(Bacteroidetes1 类群的细菌，其中硬壁菌门类群(65．5％)和p一变形菌纲类群(13．8％)的细菌为优势菌。本研究证实，内蒙古 大兴安岭森林土壤有丰富的低温纤维素降解菌资源，有潜在的应用前景。 关键词 低温纤维素降解菌，富集培养，群落结构，变性梯度凝胶 电泳(DGGE) AnalysisofCold--adapted Cellulose--degrading BacterialCommunity StructuresUnderEnrichmentCulutringConditions MENGJian—Yu FANZhao—Yang LIHeng TAOYu WANGRui—Gang FENGFu—Ying Institution forApplied andEnvironmentalMicrobiologyofLife SciencesCollege，InnerMongoliaAgriculutralUniversity,Hohhot010018， China Correspondingauthor,fengfuying@imau．edu．cn Abstract Thereareabundantcold-·adaptedcellulose--degradingbacteriaresourcesfrom soilin theDa HingganforestofInnerMongolia．Thisstudywasaimedatanalyzingthecommunity strucutreofcold- adaptedcellulosedegradingbacteria．Cold—adaptedcellulose—degradingbacteriawereisolatedbyenrichment culutreusingsodium saltofcaboxymethylcellulose(CMC—Na)medium at10oC．Cellulaseactiviytwas determinedby3，5一dinitrosalicylicacid(DNS)method．The16SrDNAgenes(V3-V5region)wereamplified byusingtheuniversalprimers(341Fand907R)．ThePCRproductswereelectrophoresedbydenaturing gradientgelelectrophoresis(DGGE)