一个特殊的顺式发夹核酶对感染烟草原生质体的影响.pdfVIP

筇38卷第5艄 上海交通大学学报 Vol3RNo5 UNTVERSITY Mav2004 2¨04年5爿 J()IJRNAI．()FSHANGHAI儿A()TONG 文章编号：1006—2467(2004 一个特殊的顺式发夹核酶对 感染烟草原生质体的影响 王 慧1， 林志新1， 孙庆申1， 昊立刚2， 范济华2， 许政喧3 (1．r海交通大学生命科学技术学院，上海200030；2．纽约大学医学院，纽约10016 3．中国科学院植物生理生态研究所，上海200052) 摘 要：研究一个烟草花叶病毒(Y1M矿)cDNA3’末端被特异切割的发夹核酶对感染原生质体的作 用．选用一个外源基因绿色水母荧光蛋白(GFPuv)作为报道基因，取代了大部分的cP编码区域， 以研究在烟草原生质体中发夹核酶对丁My栽体的复制，通过GFP的表达来确定表达量．顺式发 夹核酶对l’v栽体感染效率的影响通过体外转录来观察．T’WGFPRIB体外转录感染原生质体 的效率比与其不舍该核酶的时应物的感染效率高3～5倍．Northern杂交结果表明，包括核酶在内 的3’末端非病毒序列在体外转录反应开始后就被顺式发夹核酶切除了，当直接用载体DNApsT 71^彳VGFP MVGFPRIB感染原生质体时，感染原生质体的数量比与之相对应的psNOs感染原生 质体数多50％～80％． 关键词：烟草花叶病毒；发夹核酶；绿色水母荧光蛋白；烟草原生质体；转染 中图分类号：Q557．9 文献标识码：A ASpecif_cC妇一Hairpin Fac．|itates R．bozyme in thelnfect{0nTObacc0PrOt0Dlasts wANGH“；j．LINzh—zi小，sUN wU FANJi—hH0+XU Q讯g—she一， Li—g口n矿， zheng～kup ofI。ifeScienceand (1．Scho。1 200030，Chjna； Biotechn0109y，Sha“ghaiJiaoto“gUniv．，Sha“ghai 2．Schoolof York York1001 Medicine，NewUniv．，New 6，USA{ the Inst．ofPlant of Chinese 200052) Physi。logyEcologyAcademy。f 3．Sha“ghai Science，Sha”ghai theeffectofa ona丁My_basedvector Abslract：Thispaperinvestigated specificfis小airpinribozyme inthe tobacco fis—hair was 11M矿GFPRIBinfectionof