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Ⅰ型人类免疫缺陷病毒包膜糖蛋白120V4区氨基酸位点突变对感染细胞能力的影响.pdf
史鱼地直瘟芏苤壶垫12笙2旦垫旦整31鲞笙!魍￡蜒!』曼趟!哩醚：』!垃垫，2Q12，Y堂：3LⅨ!：4 ·401· ·论著· V4区 I型人类免疫缺陷病毒包膜糖蛋白120 氨基酸位点突变对感染细胞能力的影响 张唯哲李妍王甲业杨丹王璐晶凌虹 V4区氨基酸位点发生突变对ccR5 【摘要】目的探讨I型人类免疫缺陷病毒(HIV—1)包膜糖蛋白120 及CXCR4嗜性毒株感染靶细胞能力的影响。方法根据ADA株为CCR5嗜中}毒株，只具有感染CCR5细胞的 能力：HXB2株为CXCR4嗜性毒株，只具有感染CXCR4细胞的能力．通过重疆延伸剪接的方法．构建CCR5嗜 性及CXCR4嗜性毒株V4区丙氨酸替换突变体。将突变体表达载体与带有荧光报告基因的HIV骨架基因表达 载体共同转染真核细胞，制备假病毒颗粒。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测假病毒中HIV—lP24抗原。对假 病毒进行定蘑。将假病毒接20、40 株为对照．通过荧光素酶(RLU)测定．检测HIV—lV4区氨基酸386√117位点各突变体假病毒对细胞的感染能 力。结果成功构建HIV—lADA和HXB2株V4区丙氨酸替换突变体，各获得10株突变体。在ADA株和 HXB2株．389—391及414．417位点均发生丙氮酸替换突变体。无论是用20豫，还是40ng假病毒感染。对CCR5 体，当假病毒在20 ng时，感染能力达到了 ng时，感染细胞的能力达到了(124±35)％和(182±29)％；在40 (1274-8)％和(134士16)％；在HXB2株，395—397位点发生丙氧酸替换突变体。当假病毒在20ng时，感染能力 达到了(144±42)％；在40ng时．感染能力达到了(121±18％；两株在其他位点发生丙氢酸替换突变体．但仅 氨酸突变，使病毒完全丧失感染靶细胞能力。 【关键词】 I型人类免疫缺陷病毒； 包膜糖蛋白； 点突变； 感染 Effectsof mutafiamatmOacidIocusesofHIV-1 120V4 onitsvirus’s envelope region point glycoprotein cellsZHANGWei-zhe，uYah，WANc abilitytoinfecttarget JiDye，YANGDan，WANGLu4ing．LINGHong． and Lab and Province，and Depaameat矿MicrobiologyParasitology，KeyofInfectionImmunityofHeilw西ioag of Education Medical Bureau，HarbinUnivers毋，Harbin150081，Chinm Etiologyofm洳晒咖Province j‘mthor：LINGHong，Etruril：lingh@ems．hrbmu．edu．cn Corresponding To of virus theinfluencehuman 【Abstract】Objectiveclarify immunodeficieneytype1(HIV一1)envelope 120V4 withmutationsataminoacidloensesonitsabilitiestoenter cells．Methods gl
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