EB 病毒相关胃癌组织中NF-κB 及bcl-2 蛋白表达的研究.docVIP

精品论文 参考文献 EB 病毒相关胃癌组织中NF-κB 及bcl-2 蛋白表达的研究 文亦磊 叶星江 (西中医药大学第一附属医院病理科 530023) 【摘 要】目的探讨NF-kappa;B 及bcl-2 蛋白在EB 病毒相关性胃癌(EBVaGC)与非EB 病毒相关性胃癌(EBVnGC)中的表达及意义。方法应用原位杂交技术(ISH)检测84 例胃 癌组织中EB 病毒小RNA(EBER)表达情况；应用免疫组织化学方法(S-P 法)检测84 例胃癌组织中NF-kappa;B 及bcl-2 蛋白表达情况。结果⑴9 例(10.7%)胃癌组织EBER 原位杂交 阳性，属于EBVaGC；75 例(89.3%)胃癌组织EBER 原位杂交阴性，属于EBVnGC。⑵9 例EBVaGC 中7 例(77.8%)NF-kappa;B 表达阳性，75 例EBVnGC 中28 例(37.3%)NF-kappa;B 表 达阳性，NF-kappa;B 的表达在EBVaGC 及EBVnG 间存在差异(P＜0.05)；⑶9 例EBVaGC 中6 例(66.7%)bcl-2 表达阳性，75 例EBVnGC 中38 例(50.7%)bcl-2 表达阳性，bcl-2 的表 达在EBVaGC 及EBVnG 间无明显差异(Pgt;0.05)。结论EBVaGC 中NF-kappa;B 蛋白的高表达，提示EB 病毒可能通过影响细胞转录调控而参与了EBVaGC 发生、发展的过程。 【关键词】EB 病毒相关性胃癌；非EB 病毒相关性胃癌；NF-kappa;B；bcl-2 基金项目：广西壮族自治区卫生厅自筹经费科研课题(合同号：Z2011113) EB 病毒(EBV)属于DNA 疱疹病毒，该病毒编码大于85 个基因组，大部分人群 都感染过EB 病毒，而且EB 病毒与很多淋巴源性及上皮源性肿瘤密切相关。有研究 表明，约有10%的胃癌与EB 病毒感染有关[1]，故这类胃癌又被称为EB 病毒相关性胃 癌(EBVaGC)。NF-kappa;B 作为重要的转录调控因子，起着核心枢纽作用，它可以调控很 多基因表达，而这些基因又与细胞增殖、分化、凋亡、免疫反应、转化有着密切的联 系；bcl-2 能抑制细胞凋亡，延长细胞生存期，进而引发肿瘤。胃癌的发生、发展是一 个多步骤、多因素影响的过程，涉及的机制非常复杂，本文通过原位杂交方法检测胃 癌中EBER 表达情况及免疫组化方法检测NF-kappa;B 和bcl-2 的表达情况，探讨它们与胃 癌临床病理特征的关系及意义。 1 材料与方法 1.1 一般资料选择广西中医药大学第一附属医院2008 年1 月～2013 年6 月手术切 除并经病理检测证实为胃癌的蜡块标本84 例，所有病例术前均未进行放疗、化疗，病 理类型均为腺癌。其中男性48 例，女性36 例；年龄32～87 岁，平均年龄56 岁。 1.2EBER 原位杂交EBER 原位杂交试剂购于PanPath 公司。组织蜡块切成4um 粘 附于防脱片上，常规脱蜡及水化，蛋白酶K 消化。滴加适量杂交液，55℃下孵育1.5 小时，转移至37℃下孵育12 小时，PBS 浸泡洗涤，滴加适量一抗，于37℃下孵育30 分钟，拭去组织周围的液体，滴加适量二抗，于室温下孵育20 分钟。拭去组织周围的 液体，滴加适量HRP 聚合物，室温下孵育30 分钟，PBS 浸泡洗涤后滴加适量DAB 显色液，在室温下孵育约3-10 分钟，同时在镜下观察显色程度。 1.3 免疫组织化学法NF-kappa;B 及bcl-2 单克隆抗体均购自北京中杉金桥生物技术有限 公司。5mu;m 厚切片。常规脱蜡水化后，柠檬酸高压修复，3%H2O2 阻断内源性过氧化 物酶，其余步骤按试剂盒说明进行操作。用PBS 替代一抗作为阴性对照，用已知阳性 片作为阳性对照。 1.4 结果判读EBER 原位杂交结果判定：EBER 阳性表达于细胞核，呈棕黄色。免 疫组化采用Volm 使用的半定量法[2]：NF-kappa;B 阳性表达部位为胞质和(或)胞核，bcl-2 阳性表达部位为胞质和(或)胞膜。1.5 统计学分析应用SPSS15.0 软件进行统计学分析， P＜0.05 为差异有统计学意义。 2 结果 2.1EBER 在胃癌组织中的表达84 例胃癌组织中9 例(10.7%)胃癌组织EBER 原位 杂交阳性，属于EBVaGC(见图1)；75 例(89.3%)胃癌组织EBER 原位杂交阴性，属 于EBVnGC。 2.2NF-kappa;B 在胃癌组织中的表