cdl33和cd34在人脑胶质瘤中的表达与预后的关系.docVIP

精品论文 参考文献 CDl33和CD34在人脑胶质瘤中的表达与预后的关系 孔令军 夏清岫 刘 刚 潘 亮 　　（河北省沧州中西医结合医院神经外科 河北 沧州 061001） 　　【摘 要】目的：研究人脑胶质瘤CDl33和CD34表达与预后的关系。方法：采用免疫组化方法检测63例人脑胶质瘤中的CDl33、CD34的表达情况，并将结果与临床预后随访结果进行综合分析。结果：CDl33总阳性表达率为68.2%，其中强表达14例（22.2%），中度表达13例（20.3%），弱表达16例（25.3%），不表达20例（31.7%），有显著性差异（ P lt; 0.01）。CDl33表达水平与胶质瘤恶性程度相关（P lt; 0.01）。胶质瘤I级、II级、III级- IV级CD34标记的平均微血管密度（micro vessels density, MVD）分别为（34plusmn;13）、（67plusmn;31）、（121plusmn;48），有显著性差异（ P lt; 0.01）。CD34表达与CDl33表达水平相关（ P lt; 0.01）。CDl33表达与生存时间负相关（ P lt; 0.01）。结论：CD34和CDl33表达有一定相关性，CD34与脑胶质瘤新生血管生成有关。CD34、CDl33联合检测可准确判断患者的预后。 　　【关键词】CDl33；CD34 ；胶质瘤 ；免疫组化；预后 　　【中图分类号】R739.4 【文献标识码】B 【文章编号】1003-5028（2015）6-0535-02 　　CDl33最初被发现选择性表达在人胎肝、骨髓、脐血及外周血CD34+造血细胞中，被作为造血干细胞标记物被人们认识，迸一步研究发现CDl33也表达于神经干细胞以及神经前体细胞上。近年来有研究表明，CDl33阳性表达的肿瘤干细胞是一种具有肿瘤再生潜能的细胞，具有自我更新和多向分化的特性，是肿瘤侵袭性生长、复发及转移的根源。CD34在肿瘤间质小血管的表达作用已得到证实，目前普遍认为它是血管内皮细胞的首选标记物，能清晰显示肿瘤微血管[3]。本研究选取63例人脑胶质瘤患者的瘤组织标本，对CDl33表达及其与血管生成及与其临床预后的关系进行了研究，现报告如下。 　　1 资料与方法 　　1.1病例资料 　　研究对象为河北省河北医科大学第二医院神经外科和沧州中西医结合医院神经外科2006 年8月～2010 年5 月住院手术切除且保存完好的胶质瘤组织的石蜡包埋标本，临床资料完整，男性33例，女性30例，脑胶质瘤组织学分析根据2000年修改的WHO神经系统肿瘤分级标准对其进行组织学的分类分级，其中I级23例， II级23例， III-IV级17例。另取沧州中西医结合医院神经外科因颅脑损伤行内减压术患者6例正常脑组织作对照，所有胶质瘤患者术前均未接受过化疗或放疗等辅助治疗。所有标本经10%中性福尔马林固定，常规石蜡包埋，4微米厚切片编码备用。 　　1.2 主要试剂 　　兔抗人CD133单克隆抗体（浓缩型）购自博士德公司， SP免疫组化染色试剂盒购自河北博海生物公司，CD34单克隆抗体、DAB试剂盒、PBS缓冲液和柠檬酸盐抗原修复液，均购自北京中杉生物技术有限公司。 　　1.3 免疫组织化学染色 　　石蜡切片常规脱蜡水化，蒸馏水漂洗3min，切片置0.01mol/L,枸橼酸缓冲液（PH6.0）中用煮沸（95℃，15-20min）进行抗原修复，自然冷却20min以上，再用冷水冲洗缸子，加快冷却至室温。取出切片，蒸馏水冲洗两次，每次3min，用0.01 mol/LPBS液冲洗2次共5min。使用3%双氧水阻断灭活内源性过氧化物酶， CDl33一抗稀释度1:200，按照试剂盒说明进行操作（用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照），甩去PBS液，每张片滴加2滴新配制的DAB溶液（按说明书配制），3-5min后显微镜下观察显色情况。蒸馏水充分冲洗，苏木精轻度复染1min，常规脱水，透明，干燥，封片。 　　CD34染色步骤：石蜡切片脱蜡和水化后，用PBS(PH值7.4)冲洗3次，每次3min,切片加入装有150ml0.01%枸橼酸150ml微波抗原修复8 min,凉至室温30 min，3%过氧化氢室温孵育5 min，一抗室温孵育90 min，生物素化二抗室温孵育10 min，DAB孵育5 min,复染、透明、封片。 　　1.4 结果判定 　　CD133为跨膜蛋白，定位于细胞膜及细胞浆，以细胞膜和细胞浆出现棕黄色为阳性，低倍和高倍镜下观察并在高倍镜（400X）下随机选择5个视野，计算出阳性细胞所占的百分率。结果判定标准：阴性（-）：肿瘤组织完全不着色或阳性细胞数小于5%；弱阳性（+）：肿瘤组织阳性细胞数6%—25%；阳性（++）：肿瘤组织阳性细胞数