第六章沉淀反应2.pptVIP

第六章 沉淀反应 （precipitation reaction) 第一节 沉淀反应的特点 可溶性抗原+相应抗体 肉眼可见的沉淀 表6-1 最适比方阵测定法 二、免疫浊度测定(immunoturbidimetry) 原理：当可溶性抗原与相应抗体特异结合，二者比例合适时，在特殊的缓冲液中它们快速形成一定大小的抗原抗体复合物，使反应液体出现浊度。利用现代光学测量仪器对浊度进行测定从而检测抗原含量。 1.抗原抗体的比例：反应体系中保持抗体过量 2.抗体的质量 ：特异性强，效价高，亲和力　　　　　　　强并使用R型抗体 3.抗原抗体反应液的最适PH为6.5～8.5 4.使用增浊剂 1.透射免疫比浊法 2.散射免疫比浊法 3.免疫胶乳比浊法 第三节　凝胶内沉淀试验（gel phase precipitation） 可溶性抗原和相应抗体在凝胶中扩散，形成浓度梯度，在抗原抗体相遇并且浓度比例适当的位置形成肉眼可见的沉淀线或沉淀环。 常用的凝胶有琼脂、琼脂糖、葡聚糖或聚丙烯酰胺凝胶。 影响因素 1.抗血清要求亲和力强、特异性好和效价高，注意保存。 2.标准曲线必须每次制作。 3.每次必须加质控血清。 4.双环现象，不同扩散率抗原性相同的两个组分 5.Ig测定中，可出现测量值降低：单克隆抗体。 6.假阳性：多克隆抗体。 二、双向扩散试验 （ double immunodiffusion test） 原理：将抗原抗体分别加在琼脂糖不同的对应孔中，两者在凝胶中自由扩散，在比例合适处形成白色沉淀线。 技术要点：平板玻璃上倾注一层均匀的琼脂糖薄层，凝固后打孔，孔径为3mm，孔间距在3～5 mm之间，在相对的孔中加入抗原或抗体，放置湿盒37℃18～24h 后，观察孔周围是否出现沉淀环。 小结 沉淀反应定义和特点 沉淀反应的类型 1.液体内沉淀试验 絮状沉淀试验 免疫浊度测定 2.凝胶内沉淀试验 单向扩散试验 双向扩散试验 3.免疫电泳技术 重点 掌握沉淀反应的含义和类型 选择题 1.影响絮状沉淀试验的主要因素是（ ） A.抗原的质量 B.抗体的质量 C.抗原抗体的比例 D.反应溶液pH E.抗体特异性强 2.双向扩散试验中沉淀环弯向抗原一方是因为（） A.抗原分子量大 B.抗体分子量大 C.抗原抗体分子量大致相等 D.抗原含量大 E.抗体含量大 3.单向扩散试验出现双环的沉淀线是因为（） A.两种抗原 B.两种抗体 C.抗体为多克隆抗体 D.抗原为多态性抗原 E.抗原为性质相同的两个组分扩散率不同 4.沉淀反应中的钩状效应是因为（） A.pH浓度过高 B.pH浓度过低 C.抗体过量 D.抗原过量 E.以上都不是 5.单向扩散试验中大分子抗原和长时间扩散（48h）的结果处理宜用（） A.Mancini曲线 B.Fahey曲线 C.海德堡曲线 D.直线 E.抛物线 第四节　免疫电泳技术（immunoelectrophoresis technique） V:泳动速度cm/秒or分 d:泳动距离cm t:电泳时间 (秒/分) E:电场强度 伏特/cm 影响泳动率u的因素 内因：1.净电荷 2.质点大小 3.质点形状 外因： 1.电场强度V ( U/L)电场强度越大，带电质点泳动速度越快。 2.缓冲液的pH (pH恒定)：溶液的pH值决定了带电质点的解离程度，也决定了物质所带电荷的多少。 3.离子强度[I]溶液的离子强度越高，颗粒泳动速度越慢，反之越快。 最适:0.02-0.07 4.电渗：液体对固体支持物的相对移动. 由于琼脂中含有SO42-，带负电荷，造成静电感应致使附近的水带正电荷，而向负极移动 NH 3 + 　　　　　 NH 3 + 　　　　　NH 2 |　　　　　 +OH - | 　　　 +OH -　 | Pr-COOH ====== Pr-COO - ====== Pr-COO -  +H +　　　　　　　 +H + 阳离子　　　　 两性离子　　　　　阴离子 pHpI 　　　　　　pH=pI　　　　　 pHpI 蛋白质的等电点 (pI) ： 　　　在一定的介质中，某一蛋白质解离成阴、阳离子的趋势相等，成为两性离子 (净电荷为零),此时介质的pH称为蛋白质的等电点。 电泳时有两种力，即电