婴幼儿配方食品和乳粉泛酸的测定修改说明.docVIP

GB/T5413.17-1997 《婴幼儿配方食品和乳粉泛酸的测定》修改说明 方法一 目前测定有两种方法，方法一是微生物法，为等同采用美国公职分析化学师协会（AOAC）方法，虽然操作步骤繁杂，但测定结果准确度高。方法二是高压液相色谱法，是经实验确定的一种快速、准确的方法。《GB 5413.17-1997婴幼儿配方食品和乳粉 泛酸的测定》中，方法一中原国标中对trizma描述不详细。下面将《GB/T5413.17-1997婴幼儿配方食品和乳粉 泛酸的测定》修改内容逐一说明。 1、原标准：3.6菌种:植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum) 修改：3.6菌种:植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ATCC 8014 说明：用编码更准确明了因为其有唯一性 2、原标准：4仪器 常用实验室仪器及pH计。 修改： 4仪器 常用实验室仪器及分光光度仪，pH计 说明：原标准无分光光度仪。浊度法也是AOAC推荐方法，请参考AOAC Official Methods Analysis (1990) 15 Edition:4th supplement(1993) 3、增加 3.8Tris缓冲溶液：将24.2g三羟基氨基甲烷溶于150ml水中，用7.5mol/lNaOH调pH至8.0-8.3，然后定容至200ml，贮存于4℃冰箱中，可保存2周。 说明：原标准无此项 4、增加 3.9 2%碱性磷酸酶溶液：称取2g碱性磷酸酶溶于水中，然后定容至100ml。 说明：原标准无此项 5、增加 3.10 10%鸽子肝脏提取物溶液：将所用容器在配此试剂前一天放入4冰箱过夜。 说明：原标准无此项 6、增加 3.10.1称取30g鸽子肝脏丙酮提取物粉末放入冷的研钵中，分2次加入300ml0.2mol/lKHCO3至0℃的冰浴中研磨均匀直至呈悬浊液。 说明：原标准无此项 7、增加 3.10.2将上清液放入500ml预冷的广口烧瓶中，加150g活性Dowexl-X8放在冰浴中振摇5min，将混合液倒入离心管中，3000r/min离心5min。 说明：原标准无此项 8、增加 3.10.3再将上清液放入另一个500ml预冷的广口烧瓶中，冷冻10min。 说明：原标准无此项 9、增加3.10.4重复3.10.2和3.10.3步骤一次。然后分装于试管中，冷冻条件下保存，用前化冻。 说明：原标准无此项 方法二 目前测定产品中泛酸含量的标准是GB/T5413.17-1997《婴幼儿配方食品和乳粉 泛酸的测定》。该方法是在1997年制定的，由于受到当时科技条件的限制，方法存在含淀粉样品溶解困难、标样浓度不适宜等问题，同时由于新品种优良色谱柱的出现，流动相条件也有待于调整，先对各修订条款进行说明。 一、修改内容 1.称样量的大小 考虑含淀粉样品称样量过大时，不易被水充分溶解，同时婴幼儿配方食品和乳粉中泛酸的含量高出检测限很多，故减小称样量，乳粉称样量约5g,含淀粉量较大的样品称样量约为2g。 2.淀粉酶使用量 由于含淀粉样品用水溶解后成浆糊状，粘稠度过高，不好调pH值，而且不易过滤，所以样品中需加入淀粉酶，于45℃恒温培养箱中酶解半小时。在不影响样品酶解效果的前提下，可适当的减少酶的用量，可以减少酶所带来的干扰物，便于分离。通常情况下，2g含淀粉样品，应加入0.2g左右的高峰氏淀粉酶。 3.离心与过滤 由于样品处理时液体量大，所以离心分离时，要求离心管的容积也要大。另外，离心过程中，容易发生离心管破碎的情况，同时离心后，还要洗沉淀残渣，较为繁琐。故可以省略离心这一步骤，直接过滤后冲洗沉淀残渣和三角瓶，简单安全，易操作。 4.标准工作液浓度的选择 对于标准工作溶液的浓度，应与由样品处理成的待测液的浓度大小一致，以提高测量的准确度。所以原标准工作溶液的浓度应再稀释十倍。 5.色谱条件的选择 随着色谱柱技术的改进和发展，过去的色谱柱填充剂已经被淘汰或不生产，所以用现在常用色谱柱代替。色谱柱换了，流动相也要随着相应调整，综合考虑分离效率、保留时间、基线稳定和色谱柱的使用寿命，选用和推荐现在的流动相。 修改后各项参数考察 按照修订后的方法，组织多家实验室进行了方法验证，现将方法验证测定结果的重现性限和再现性限计算如下： 三家实验室参加了该方法的验证，参试样品6个： 水平 水平1 水平2 水平3 水平4 水平5 水平6 样品名称 奶粉1 奶粉2 奶粉3 米粉1 米粉2 米粉3 1、标准曲线的绘制 为确保待测液中的泛酸在线性范围内，必须使含量控制在一定范围内：经测定表明，以泛酸含量为1.00、2.00、4.00、8.00、12.00μg/mlY=382.32X+179.15；相关系数R=0.9952。由此证明，该标准系列浓度范围内线性相关性好。 泛酸