小麦内生固氮菌分离及其acc脱氨酶测定-中国农业科学.pdfVIP

中国农业科学 2012,45(6): 1066-1073 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.06.004 小麦内生固氮菌分离及其ACC 脱氨酶测定 秦宝军，罗 琼，高 淼，胡海燕，徐 晶，周义清，孙建光 （中国农业科学院农业资源与农业区划研究所/农业部作物营养与施肥重点实验室，北京 100081） 摘要：【目的】了解小麦内生固氮菌数量，筛选具有ACC （1-aminocyclopropane-1-carboxylate, 1-氨基环 丙烷-1-羧酸）脱氨酶活性的小麦内生固氮菌，确定筛选菌株的系统发育地位与分类地位，为微生物肥料生产收集 菌种资源。【方法】样品表面灭菌后采用无氮培养法筛选内生固氮菌，乙炔还原法测定菌株固氮酶活性；采用ACC 唯一氮源法筛选ACC 脱氨酶阳性菌，比色法定量测定ACC 脱氨酶活性；PCR 扩增得到菌株 16S rDNA，通过序列测 定和相似性分析研究菌株的系统发育；通过形态、生理生化特征和 16S rDNA 序列比对鉴定菌种。【结果】小麦体 内固氮菌数量为（0.2—17.8）×105 -1 cfu·g 鲜重；分离到小麦内生固氮菌60 株，固氮酶活性在1—36 nmol C H /h·mg 2 4 蛋白，其中9 株具有ACC 脱氨酶活性，活性在0.87—9.32 µmol α-丁酮酸/h·mg 蛋白；新分离菌株9136 固氮酶活 性为1.82nmol C H /h·mg 蛋白，ACC 脱氨酶活性为9.32 µmol α-丁酮酸/h·mg 蛋白，初步鉴定为假单胞菌Pseudomonas 2 4 sp.。【结论】 田间自然生长的小麦体内有大量固氮菌，数量在105 -1 cfu·g 鲜重，其中部分菌株具有ACC 脱氨酶活 性，个别菌株具有较高的ACC 脱氨酶活性，可能对作物抵御不良环境具有作用。 关键词：小麦；内生固氮菌；ACC 脱氨酶；根际促生细菌 Isolation of Wheat Endophytic Diazotrophs and Determination of 1-Aminocyclopropane-1-Carboxylate Deaminase QIN Bao-jun, LUO Qiong, GAO Miao, HU Hai-yan, XU Jing, ZHOU Yi-qing, SUN Jian-guang (Institute of Agricultural Resources and Regional Planning, Chinese Academy of Agricultural Sciences/Key Laboratory of Crop Nutrition and Fertilization of Ministry of Agriculture, Beijing 100081) Abstract: 【Objective 】 The objective of this study is to determine the ammount of wheat endophytic diazotrophs and screen for ACC ( 1-aminocyclopropane-1-carb