不同发展阶段黑素瘤细胞中Wnt5A及Wnt11基因表达动态变化.docVIP

不同发展阶段黑素瘤细胞中Wnt5A及Wnt11基因表达动态变化 　【摘要】 目的： 研究Wnt/Ca2+通路中Wnt5A，Wnt11基因在不同发展阶段的黑素瘤细胞中的表达水平. 方法： 运用RTPCR法，检测正常黑素细胞和6种黑素瘤细胞中Wnt5A和Wnt11基因表达水平. 结果： 在正常黑素细胞和不同的黑素瘤细胞中，Wnt5A和Wnt11基因的表达均表现出动态变化的特征. Wnt5A和Wnt11水平在正常黑素细胞中表达很低，而在黑素瘤细胞中有不同程度的升高. 另外，分别来自表面生长阶段、结节状生长阶段和黑色素瘤淋巴结转移的 WM793B, 451Lu和A2058细胞系中，Wnt5A和Wnt11基因表达水平逐渐下降，甚至在A2058细胞系中，两种基因的表达均低于正常黑素细胞. 结论： 在黑素瘤的不同发展阶段，Wnt5A和Wnt11基因表达的动态变化使非经典的Wnt/Ca2+通路激活程度不同. 【关键词】 黑素细胞；黑色素瘤；Wnt5A；Wnt11 　　【Abstract】 AIM： To investigate the expression levels of Wnt5A and Wnt11 genes in Wnt/Ca2+ signal pathway activated in different stages of melanoma progression. METHODS: By using RTPCR, we detected the expression levels of Wnt5A and Wnt11 genes in cultured normal epidermal melanocytes and 6 skin melanoma cell lines. RESULTS: RTPCR results showed that the characteristics of Wnt5A and Wnt11 expression were similar, both of which were dynamically changed in different cells. Compared with the low levels in normal melanocytes, Wnt5A and Wnt11 were upregulated with different intensities in the most investigated melanoma cell lines except for A2058. Interestingly, WM793B, 451Lu and A2058 cell lines, which respectively derived from primary superficial spreading situation, nodular melanoma, and lymph node metastases, gradually decreased the Wnt5A and Wnt11 expression levels. CONCLUSION： During different stages of melanoma progression, dynamic change of Wnt5A and Wnt11 gene expressions activates noncanonical Wnt/Ca2+ pathway with different degrees. 　　【Keywords】 melanocytes; melanoma; Wnt5A; Wnt11 　　0 引言 　　目前对于非经典的Wnt/Ca2+信号通路在恶性肿瘤发生中的作用尚未明确. 早期研究显示： Wnt5a属于Wnt原癌基因家族成员之一,由该蛋白介导的Wnt/Ca2+激活可以抑制多种癌细胞的生长，例如结肠［1］、癌肾癌［2］和膀胱癌［3］. 但是有些研究发现它可以促进细胞的过度增殖和分化,导致多种癌症的发生，如肺癌、前列腺癌［4］、胃癌［5］和乳腺癌［6-7］. 最近，非经典的Wnt/Ca2+信号通路在黑素瘤发生和发展中的作用也逐渐受到重视. 虽然Weeraratna［8］提出在黑素细胞成熟、增殖和形成肿瘤的阶段需要不同的Wnt蛋白家族成员参与，但是该信号通路发挥作用的确切机制尚未明确,值得深入研究. 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 角质形成细胞无血清培养基KSFM，DMEM、胰蛋白酶，购自美国GIBCO公司，胎牛血清FCS购自杭州四季青公司. 逆转录试剂盒均购自Gibico公司，TRIzol购自Invitrogen公司.原代培养黑素细胞取自15～25岁的青少年包皮环切手术标本.