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半枝莲醇提物对肝纤维化大鼠TGF-β1影响 　 作者：李中华，赵晓芳，李珪，余胜民 【摘要】 目的探讨半枝莲醇提物抗肝纤维化的作用机理。方法采用CCl4复合因素大鼠肝纤维化模型造模方法制作大鼠肝纤维化模型,观察研究半枝莲对肝纤维化大鼠血清透明质酸酶(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、IV型胶原(Ⅳ.C)含量及通过免疫组化图像分析肝组织转化生长因子β1(TGF-β1)的含量及不同剂量与疗效的关系，并探讨半枝莲醇提物抗肝纤维化的可能机制。结果半枝莲能显著抑制大鼠血清中HA、LN、PCⅢ、IV.C、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的表达及免疫组化图像分析TGF-β1含量。肝纤维化评分明显降低(Plt;0.05)。结论半枝莲具有治疗肝纤维化的作用,其机理可能与抑制肝组织中TGF-β1的合成有关。 【关键词】 半枝莲; 肝纤维化; 转化生长因子-β1 　半枝莲为唇形科植物半枝莲Scutellaria barbata D.Don的全草，微苦，凉，通气道、水道，有清热解毒、活血祛瘀、消肿止痛、利尿和抗癌等作用，用于咽喉肿痛、肿瘤、阑尾炎、肝炎、肝硬化腹水、肺脓疡、吐血、衄血、血淋、肾炎水肿等[1]治疗;据《中华肿瘤治疗大成》记载，半枝莲主治原发性肝癌等消化道肿瘤、肺癌及子宫颈癌妇科肿瘤等，在广西民间有用其治疗肝炎、肝纤维化的用药习惯。为了探讨其机理,本实验研究了半枝莲对四氯化碳致大鼠肝纤维化模型的作用。 　　1 材料 　　1.1 动物Wistar雄性大鼠72只,清洁级,体质量(220±30)g,由广西医科大学医学院实验动物中心提供,动物合格证号:桂医动字第2008324号。 　　1.2 药品与试剂半枝莲原料,由南宁市医药公司提供,经广西中医学院药学院生药教研室刘寿养教授鉴定确认后,粉碎为粗末(Φ1～3mm)并用70%乙醇提取半枝莲溶液。四氯化碳:AR级,由广西桂林生科精细化学品公司生产,批号秋水仙碱(Colchicine)德国进口,上海医药公司分装,批号:1155-2009。谷丙转氨酶(ALT)试剂盒,谷草转氨酶(AST)试剂盒均是桂海科技试剂公司产品(批号:。TGF-β1 ELISA试剂盒由上海森雄科技实业有限公司生产。 　　2 方法 　　2.1 动物分组健康清洁级Wistar雄性大鼠72只,体质量220～250g,随机取10只作为正常对照组(A组)。剩余大鼠进行肝纤维化造模,于第4周末A组及造模大鼠各随机处死2只证实肝纤维化形成后,将其余造模大鼠随机分为病理模型组(B组)、半枝莲醇提物溶液低剂量、中剂量、高剂量治疗组(C、D、E组)、秋水仙碱对照组(F组)共5个组,每组10只。 　　2.2 造模方法本实验采用CCl4复合因素大鼠肝纤维化模型造模方法,方法参照刘强等法[2]给Wistar大鼠首次皮下注射CCl45 ml/kg体质量,以后皮下注射40% CCl4花生油3 ml/kg,2次/周,共6周。但有所改进:采用高脂低蛋白食物(用玉米面为饲料,加0.5%胆固醇,实验第1、2周加20%猪油), 10%酒精为唯一饮料,皮下注射CCl4(第1次用0. 5 ml/100 g体质量,以后每隔3 d皮下注射40% CCl4油剂0. 3 ml/100 g体质量)。为了防止肝脏自然修复对实验结果的影响,各组于用药开始后仍每周注射40%CCl4油剂0. 3 ml/100 g体质量1次(A组除外)。 　　2.3 给药方法A组正常饲料喂养,同等容积花生油皮下注射4周后灌胃与治疗组同容积的生理盐水;B组造模4周后灌胃与治疗组同体积的生理盐水;C组:造模4周后灌服半枝莲0.25 g/100 g体质量;D组造模4周后灌服半枝莲0.5 g/100 g体质量;E组造模4周后灌服半枝莲1.0 g/100 g体质量; F组造模4周后灌服秋水仙碱10 μg/100 g体质量。以上各组灌胃液体量为1 ml/100 g体质量,1次/d,共12周,其浓度及等效剂量按体表面积折算。 　　2.4 观测指标及测定方法 　　2.4.1 肝纤维化血清指标检测A，B，C，D，E，F各组分别于用药治疗后12周,禁食12 h后称重,用10%水合氯醛腹腔麻醉,腹主动脉采血,用真空负压采血管收集,室温静置1.5 h,以2 500 r/min离心15 min,取上层血清,分装于离心管中;用AU5400全自动生化分析仪测定血清ALT、AST;用放免法测定血清HA、LN、PCⅢ、 IV.C (严格按试剂盒说明书进行操作)。 　　2.4.2 常规病理学检查将各组石蜡切片均作常规HE染色,光镜下观察肝组织改变及胶原纤维的分布,同时采用王宝恩等[3]肝纤维化的分级法进行