实训一刺激与反应.docVIP

实训一 刺激与反应 【实训目标】 1．学习两栖类动物坐骨神经-腓肠肌标本的制备。 2．观察不同刺激强度、刺激频率与肌肉收缩反应之间的关系；加深理解阈下刺激、阈刺激、阈上刺激，单收缩、强直收缩等基本概念。 【实训原理】 活组织具有兴奋性，能接受刺激发生反应。蛙类的某些基本生命活动和生理功能与哺乳类动物有相似之处，而且其离体组织的生活条件比较简单，易于控制和掌握，来源也较丰富，因此在生理学实验，常用蛙或蟾蜍的坐骨神经腓肠肌标本来观察神经肌肉的兴奋性、刺激与反应的规律及肌肉收缩的特点等。 【实训对象和器材】 实训对象：两栖类动物蟾蜍或蛙。 实训器材：探针、蛙板、刨钉、小木锤、粗剪刀、手术剪、手术镊、玻璃分针、锌铜弓、肌槽、铁支架、双凹夹、张力换能器、任氏液、培养皿、污物缸、MedLab生物信号采集处理系统。 【实训内容与方法】 一．两栖类动物坐骨神经-腓肠肌标本的制备 1. 破坏脑和脊髓：左手握住蟾蜍，用食指压住其头部前端，右手持探针，垂直刺入枕骨大孔（两侧耳后缘连线前约3mm处凹陷处），有落空感时即表明已进入枕骨大孔，然后向前刺入颅腔，左右搅动，捣毁脑组织；再将探针原路退回，并向后刺入椎管捣毁脊髓。此时蟾蜍呼吸消失，四肢松软，表示脑和脊髓已完全破坏。 2. 剪除躯干前部、内脏及剥皮：用左手拇指和食指捏住蟾蜍腰部，在其骶髂关节水平以上1～2cm处用粗剪刀剪断脊柱，使蟾蜍头与内脏自然下垂,剪去头部、前肢及所有内脏(注意勿损伤坐骨神经)，留下两后肢、部分脊柱及由它发出的坐骨神经。左手捏脊柱断端（注意不要握住和压迫神经），右手捏住其上的皮肤边缘，向下剥掉全部后肢皮肤。 3. 分离两腿：用手术镊夹住脊柱并将标本提起，将背面向上，使尾骨上翘，用粗剪刀剪去尾骨尖（注意勿损伤坐骨神经），然后沿中线用将脊柱剪为两半，并从耻骨联合中央剪开两侧大腿，这样两腿即完全分离。将两条腿浸于盛有任氏液的培养皿中。 4. 分离坐骨神经：将一条蟾蜍的小腿背侧和脊柱腹侧向上，用刨钉固定于蛙板上。用玻璃分针沿脊柱向下分离坐骨神经，再循坐骨神经沟（股二头肌及半膜肌之间的裂缝处），用玻璃分针小心分离，剪断坐骨神经的所有分支，直至膝关节处。神经完全暴露后，用粗剪刀剪下一段与神经相连的脊柱，并剪除全部大腿肌肉，用粗剪刀将股骨刮干净，然后在股骨中部剪去上段股骨，保留的部分就是坐骨神经小腿标本。 5. 分离腓肠肌：用玻璃分针将腓肠肌跟腱分离并穿线结扎，在结扎处下端剪断跟腱。左手执线提起腓肠肌，分离至膝关节处，然后沿膝关节将小腿其余部分剪掉，这样就制成一个带有股骨的坐骨神经腓肠肌标本。 6. 用锌铜弓检查标本：用经任氏液沾湿的锌铜弓迅速接触坐骨神经，如腓肠肌发生明显而灵敏的收缩，则表示标本的兴奋性良好。将标本在任氏液中浸泡 5～10 分钟即兴奋性稳定后，再用于以下实验。 二．观察刺激与反应 （一）固定标本，连接MedLab生物信号采集处理系统 将标本固定于肌槽中，股骨断端置于槽侧壁的小孔中，旋紧螺丝钉固定，坐骨神经放置在肌槽电极上。将张力传感器固定在铁支架上，将系在腓肠肌肌腱上的丝线连接到张力传感器弹簧片上，使丝线处于垂直位置并刚好拉直标本。张力传感器输出端与生物信号采集器内放大器通道连接。 （二）观察项目 1. 观察刺激强度对骨骼肌收缩的影响 打开计算机，启动MedLab生物信号采集处理系统软件，进入系统软件窗口。操作步骤参考如下： ①选择实验项目：点击软件主页上方的“实验”菜单，弹出下拉式菜单，选中“常用生理学实验/刺激强度对骨骼肌收缩的影响”。 ②记录观察：启动记录按钮，刺激强度从0.1V开始，点击“刺激”按钮，并逐渐增大刺激强度，强度增量为0.1V，找出刚能引起肌肉出现微小收缩的刺激强度（阈强度）。 ③继续增加刺激强度（阈上刺激），观察肌肉收缩反应是否也相应增大（即生物信号采集处理系统上记录的曲线是否相应增高）。 ④继续增加刺激强度，直至肌肉收缩曲线不再继续升高为止。找出刚能引起肌肉出现最大收缩的最小刺激强度（最大刺激强度）。 2. 观察刺激频率对骨骼肌收缩的影响 ①选择实验项目： 点击“实验”菜单，选中“常用生理学实验/刺激频率对骨骼肌收缩的影响”。 ②记录观察：启动记录按钮，用最大刺激强度的连续刺激，刺激频率按1 Hz、2 Hz、3 Hz、4Hz 、5 Hz、10Hz、15 Hz、20 Hz、25 Hz、30 Hz逐渐增加，分别记录不同频率时的肌肉收缩曲线，观察不同频率时的肌肉收缩变化。 【实训注意事项】 1. 毁损脑脊髓时，防止蟾蜍耳后毒液射入眼内。 2. 制备标本时尽量避免手和金属器件触碰坐骨神经和腓肠肌。 3．随时用任氏液湿润坐骨神经-腓肠肌标本，使标本具有良好的兴奋性。 4．做腓肠肌最大收缩时，刺激强度不宜太大，否则会损伤神经。 5．在观察刺激频率对腓肠肌收