ELISA法检测外周血环氧合酶-2活性在亚临床冠状动脉粥样硬化中应用探析.docVIP

ELISA法检测外周血环氧合酶-2活性在亚临床冠状动脉粥样硬化中应用探析[摘要] 目的：探讨酶联免疫法（ELISA）检测外周血环氧合酶-2（COX-2）活性在亚临床冠状动脉粥样硬化（AS）中的应用价值。方法：应用选择性COX-2抑制剂（塞来昔布）对亚临床冠状动脉粥样硬化进行短期干预，ELISA法检测各分组血浆COX-2水平，并结合临床资料进行分析。结果：亚临床AS组COX-2水平[（10.84±3.11）U/L]，明显高于正常对照组[（6.97±1.25）U/L]（P1.0 mm或发现斑块且无心脑肾及外周血管病变的临床表现[3]。随机选择65例分成两组：塞来昔布组35例和安慰剂组30例。对照组来自体检健康人群共40例[男25例，女15例，年龄32～81岁，平均（54.5±12.3）岁]。对照组均无高血压、糖尿病及心、肺、肝、肾、脑和血液系统的疾病，无近期外伤手术史。全部入选对象均排除有急慢性感染、肿瘤、免疫性及变态反应性疾病，全部受试对象均征得本人同意并经医院伦理委员会讨论批准。测定全部入选对象血浆环氧合酶-2活性、炎症因子超敏C反应蛋白（hs-CRP）水平并观察血浆环氧合酶-2活性与hs-CRP的相关性。塞来昔布组给予塞来昔布200 mg，每日1次口服；安慰剂组给予安慰剂。连用10 d后检测塞来昔布组和安慰剂组cox-2血浆活性水平。 1.2 仪器与试剂 酶标仪（型号：ELX800NB，美国BIO-TEK公司），全自动生化分析仪（型号：日立7600），低温离心机（型号：DDL-5）等。COX-2试剂盒（批号：760151，西班牙Cayman公司）。Hs-CRP试剂盒(批号上海长征)。 1.3 方法 1.3.1 标本收集全部入选对象均采集静脉血3 ml，其中塞来昔布组与安慰剂组用药前后分别采集静脉血3 ml，EDTA抗凝，低温离心机3 000 rpm/min，4℃离心5 min，分离血浆-70℃冻存备用。 1.3.2 实验方法ELISA法检测外周血血浆COX-2活性水平，严格按试剂盒说明书完成操作。hs-CRP检测采用免疫比浊法，全自动生化仪测定。 1.4 统计学分析 应用SPSS 11.0软件系统进行统计学处理。所有检测指标均进行正态性检验，正态分布的各计量资料以均值±标准差(x±s)表示，两组间计量资料比较用t检验。双侧P 直线相关分析发现血浆COX-2活性水平和hs-CRP之间呈显著正相关（r=0.812，P＜0.05）。 3 讨论 AS是一种由众多炎性细胞因子参与的血管慢性炎症反应过程。亚临床AS是指有AS的易患因素如年龄、性别、吸烟、肥胖、高血压、高血脂、糖尿病以及胰岛素抵抗等，而无AS的临床表现。亚临床AS阶段已经存在活跃的低度慢性炎症，动脉内的轻微炎症是一个引发刺激、损伤、愈合的循环，在长达十年或几十年的进程中周而复始，形成斑块，其结果导致动脉狭窄或粥样斑块。 COX-2在动脉硬化发生发展过程中具有重要作用。炎症情况下，COX-2在炎症部位表达增加，在动脉粥样硬化发生、发展过程中，通过激活炎症细胞因子，增加血管通透性，刺激血管平滑肌细胞迁移与增生等机制发挥作用[4]。已有证据表明[5]：COX-2作为前列腺素（PG）合成过程中的一个限速酶，在炎性反应中起重要的调控作用。当COX-2大量被诱导生成和表达时，炎性反应被放大和增强。COX-2还可诱导血管生长因子合成，使新生血管增多，促进粥样斑块病变的发生和发展[6]。因此降低细胞中COX-2表达是治疗动脉粥样硬化的一个关键环节。选择性COX-2抑制剂可以抑制血管炎症，因而可以减少单核细胞浸润、延缓AS进程、增加斑块稳定性从而减少粥样硬化血栓事件[7-8]。表1中观察到炎症因子hs-CRP相比正常对照组显著增高（P＜0.05）。 本研究通过监测对各分组血浆COX-2水平表明：可以通过观察指标变化来间接判定AS疗效、预后等，从而为COX-2靶向治疗提供一定依据。表1显示：亚临床AS与对照组比较，COX-2和炎症因子hs-CRP显著升高（P＜0.05）。表2显示：研究对象经分组治疗后与用药前相比，塞来昔布组COX-2水平和hs-CRP均明显降低（P＜0.05），接近正常对照组水平（P＞0.05），说明局部炎症反应活跃有所降低；安慰剂组前后则无明显差异（P＞0.05）。血浆COX-2活性水平与hs-CRP相关性分析可能揭示：COX-2抑制剂有助于控制局部炎症反应，遏制动脉粥样硬化发展进程。 COX-2通过刺激单核细胞而调节PGE2的过度活化可能为那些无症状患者的亚临床动脉粥样硬化的诊断提供了一个新的标记物，为动脉粥样硬化性疾病的早期诊断和预防提供可靠依据。因此，E