丙型肝炎疫苗研究进展.docVIP

丙型肝炎疫苗研究进展关键词：??免疫?疫苗? 　　?摘　要　目前,对慢性丙型肝炎尚无有效的治疗方法。DNA疫苗可诱导机体产生特异性体液和细胞免疫应答,丙型肝炎病毒(HCV)的DNA疫苗不仅可用干预防,而且有望成为治疗HCV持续感染的有效工具。随着噬菌体呈现技术、转细胞技术、核酸免疫技术等用于HCV感染近年来有关HCV感染的研究进展很快，但主要体现在实验诊断技术的发展、抗病毒治疗的应用、发病机理的探讨和病理改变的观察等方面，而有关HCV感染的保护性免疫和疫苗制备的研究进展则很慢。虽然HCV检测技术的改进和提高已大大降低血液制品传播HCV的危险性，但在高危人群中HCV感染仍严重，甚至不少感染者并没有明显的输血史；由于HCV基因序列的高度变异性，导致HCV准种(quasispecies)的存在和免疫逃避现象，从而使HCV得以逃脱宿主免疫机制作用，造成HCV感染慢性化，因此，研究预防/治疗性疫苗，以控制HCV感染有着重要意义。合成肽疫苗由于具有制备容易、可大量生产以及稳定、易保存、副作用少和使用较安全等优点，近几年得到了广泛重视。肝炎以及社区获得性肝炎的主要病原因子，虽然通过对献血者进行抗-HCV的筛选使输血后HCV的感染率得到了显著的降低，但在高危人群中仍存在社区获得性的HCV感染，目前全世界约有1.7亿HCV感染者,其中约有50%急性感染者转变为慢性,进而发展为肝硬化和肝细胞性肝癌.HCV感染后缺乏有效的保护性免疫。可能的原因是：（1）HCV高度变异，逃避机体的免疫清除；（2）HCV在肝组织及血液中含量低及诱导机体产生保护性的抗原性弱；（3）病毒颗粒与低密度脂蛋白或免疫球蛋白紧密联接，导致抗原决定簇被掩盖；（4）外周血淋巴细胞可能有HCV储存库的作用[1]，对HCV感染目前还有一种有效的治疗手段，慢性HCV感染者对-α干扰素的反应可低至15%～25%，其它抗病毒核酸类似物的效果甚微，因此，需要提高治疗手段及发展有效的疫苗以控制HCV感染。HCV的包膜蛋白是宿主攻击的主要目标，一直都是HCV疫苗研制的首选抗原。本文概述了近年来对HCV包膜蛋白的体液免疫及疫苗研究等方面的进展。 　　1?包膜糖蛋白的结构特征 　　人血浆内的免疫球蛋白大多数存在于丙种球蛋白（γ-球蛋白）中。HCV属于黄病毒家族的一员，其基因组全长约9.4kb，编码3010～3?033个氨基酸的多蛋白前体，结构蛋白（核心蛋白C，包膜蛋白E1和E2）在宿主内质网中信号肽酶的作用下[2，3]，裂解出包膜蛋白E1和E2对应的氨基酸位置分别为E1：192～383；E2：384～809。E1糖蛋白是一个约30～35kD的糖基化蛋白，含N-糖基化位点5～6个，脱糖基后为21kD。E2糖蛋白含糖基化位点约11个，其糖蛋白的分子量为58kD～70kD，在内源性糖基化酶的作用下，得36kD～40kD的脱糖基蛋白[4]。目前的研究表明，HCV?e1、E2蛋白通过非共价键相连形成异源二聚体，代表了HCV包膜糖蛋白的天然构象。E2的N端为高变区（HVR），HVR1位于氨基酸的384～411，日本学者的研究显示，在474～480位存在第二个高变区（HVR2），但对它的研究相对较少。 　　2?体液免疫 　　2.1免疫球蛋白是机体受抗原其主要作用是与抗原起免疫反应，生成抗原-抗体复合物病毒的包膜蛋白对于宿主产生体液免疫反应很重要，因为宿主首先接触的是包膜蛋白，而且这些蛋白的表达水平较高；宿主的保护性免疫常依赖于针对病毒表面蛋白的抗体，该抗体能阻断病毒与敏感细胞的结合，也可能通过加强细胞免疫清除病毒，因此，研究针对HCV包膜蛋白的体液免疫具有重要意义。HCV感染后血清中病毒含量极低，同时目前缺乏有效的体外培养系统及合适的动物模型繁殖病毒，无法获得大量的天然病毒抗原，目前只能通过合成肽或基因重组的方法，获得HCV包膜蛋白抗原，用于研究HCV感染者中针对HCV包膜蛋白的免疫特征。 　　根据外膜区推测的相应氨基酸序列，合成一系列相互重叠的多肽作为抗原，可对外膜区的抗原表位进行定位。Ray的研究表明，在E1区存在两段潜在的表位，P1：210～223，P2：315～327，P1位于变异较大的区哉，P2位于高度保守的区哉，在38份感染者血清标本中，有35份（92%）与P2反应，仅17份（44?.7%）与P1反应[5]。Jackson等的研究认为，代表E1、E2非高变区肽20段中仅1段与45份抗-HCV（+）血浆标本有明显的反应，而代表高变区的24个肽中有18个与抗-HCV（+）的血浆标本反应，且40%的血标本与两个以上的肽起反应，其中有的肽段的差异达50%以上，有两份血标本与7个不同的肽序列有交叉反应，结果表明，许多抗-HCV（+）的标本中有广泛的抗高变区抗体存在，可能这些抗体限制了高变区序列的变异[6