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微生物产弹性蛋白酶制取方法探析摘要：目的探讨微生物产弹性蛋白酶的制取方法。方法将产弹性蛋白酶的枯草芽孢杆菌接种到发酵培养基中，摇床发酵培养后，离心收集发酵液，并经过硫酸铵盐析、DEAE-Sephadex A-25阴离子交换层析、Sephadex G-75凝胶过滤层析等步骤纯化弹性蛋白酶。结果经过上述纯化步骤，弹性蛋白酶纯化倍数达到了33倍，回收率达到12 %，酶蛋白比活达到了528 U/mg 。结论此纯化工艺较为理想，获得了较纯的酶蛋白。 关键词：弹性蛋白酶；枯草芽孢杆菌；分离；纯化 中图分类号：Q939.97文献标识码：A文章编号：1672-979X(2007)11-0040-03 Approach on Preparative Method of Elastase Produced by Microorganism FANG Shang-ling, HU Jia- jun , ZHU Nan （College of Bioengineering, Hubei University of Technology, Wuhan 430068 ,China） Abstract：Objective To investigate the preparative method of elastase produced by microorganism. Methods A elastase-producing strain of Bacillus subtilis was inoculated into fermentation medium and cultivated on a rotary shaker。The broth was collected by centrifugation. The purification of elastase was achieved by combination methods of (NH4)2S04 fractionation, anion exchange chromatography on DEAE-Sephadex A-25 and gel filtration chromatography on Sephadex G-75. Results Through the purification procedures shown above, the purification multiple of elastase was 33, the recovery rate was up to 12 % and the specific activity was about 528 U/mg.Conclusion The purer elastase can be obtained by this ideal purification technology. Key words：elastase; Bacillus subtilis; separation; purification 弹性蛋白酶（elastase）是一种以降解不溶性弹性蛋白质为特征的水解酶，此酶属于丝 氨酸蛋白酶，可由动物胰脏提取或由微生物发酵制得。从胰脏提取的弹性蛋白酶价格较高，因此，采用微生物发酵法生产弹性蛋白酶具有广阔的应用前景[1]。本研究以微生物发酵液为原料，采用盐析、离子交换层析和凝胶过滤层析方法进行弹性蛋白酶纯化，并结合SDS对纯化酶进行测定。 1材料 1.1菌种 弹性蛋白酶生产菌株枯草芽孢杆菌B1由本实验室筛选并分离。 1.2试剂 弹性蛋白、刚果红-弹性蛋白（Sigma公司）；K2HPO4（上海恒信化学试剂有限公司）；DEAE-Sephadex A-25，Sephadex G-75（Pharmacia公司）。 1.3仪器 磁力搅拌器（江苏岸头分析仪器厂）；旋转式摇床（中国科学院武汉科学仪器厂）；可见分光光度计（北京瑞利分析仪器公司）；电热干燥箱（江苏海门县三和农具厂）。 1.4培养基 发酵培养基（w/v）：干酪素3.0 g，葡萄糖4.0 g，玉米提取液0.2 g，K2HPO4 0.2 g，MgSO4?7H2O 0.01 g，pH 8.8。115 ℃下灭菌30 min。 种子培养基（w/v）：牛肉膏0.4 g、 蛋白胨0.6 g、酵母膏0.2 g、NaCl 0.5 g，pH 8.8。121 ℃下灭菌20 min。 2方法 2.1丙酮沉淀法提取弹性蛋白酶 发酵液在4 ℃、5 000 r/min条件下离心30 min，去除菌体，上清液置冰浴中。取上清液，加入与上清液等体积的预冷丙酮，充分搅拌后