健脾补肺对D-半乳糖诱导小鼠皮肤衰老模型影响实验探究.docVIP

健脾补肺对D-半乳糖诱导小鼠皮肤衰老模型影响实验探究[摘要]目的：观察健脾补肺对抗皮肤衰老的作用。方法：建立小鼠D一半乳糖衰老模型，与维生素E比较，观察健脾补肺4y(资生-汤)高、中、低三个剂量组对羟脯氨酸、透明质酸、皮肤蛋白和形态学的效应。结果：资生汤可以提高皮肤羟脯氨酸和皮肤蛋白的含量，改善皮肤衰老形态学。结论：健脾补肺对D－半乳糖所致小鼠衰老皮肤有对抗作用。 [关键词]健脾补肺；资生汤；抗皮肤衰老；羟脯氨酸；透明质酸；形态学 [中图分类g-]R289．5　[文献标识码]A　[文章编号]1008―6455(2007)02―0252―03 中医理论认为肺主皮毛，主卫气；脾主肌肉，化营气；营卫又“熏肤充身泽毛”。皮肤是最早被观察到的衰老器官，肺脾营卫可能与皮肤衰老状况直接相关。我们选用中药方资生汤，通过动物实验观察其健脾补肺、调理营卫对模型动物衰老皮肤的影响。 1材料和方法 1．1实验动物：健康4月龄昆明种小鼠120只，雌雄兼用，购自北京大学医学部实验动物中心。各组小鼠在相同条件下，自由饮水、摄食，保持自然光照，实验动物喂全价颗粒饲料(购自北京大学实验动物饲料厂)。 1．2实验药物、模型建立及给药方法：资生汤由人参、黄芪等组成，药物购自北京中医药大学国医堂，由本校药学系中药制备教研室加工、浓缩成4g／ml(每毫升含4g生药)的浸膏，避光冷藏备用，灌胃时用生理盐水配成所需浓度。以维生素E为阳性对照药(购自北京市售药店)，把120只4月龄昆明种小鼠雌雄分开，每组小鼠性别、体重均衡，随机分为6组，每组20只，分别设为正常组、模型组、阳性对照组(简称阳性组)、资生汤高剂量组、中剂量组和低剂量组(分别简称资高、中和低组)，正常组常规进食饮水及光照。其他各组参照文献按100mg／kg体重每天颈背部皮下注射D一半乳糖，每周禁食称重一次。模型组每天灌服生理盐水，阳性对照组每天灌服维生素E 50mg／kg，资生汤高、中、低剂量组按(生药／体重)8g／kg、4g／kg、2g／kg灌胃，连续6周。 1．3取材方法：第7周处死动物前一天，所有动物两肩胛至两髂骨之间背部皮肤以10％Na~S溶液对称脱毛，第2天用10％水合氯醛按3．5ml／kg体重腹腔注射麻醉，腹主动脉取全血放入肝素钠管中，3 500转／min，离心20min取上清液冷藏待测。剪下背部脱毛后的皮肤、铺平，用直径为1．4cm的打孔器对称取下4块皮肤，除去皮下脂肪后将其分别适当剪碎，同侧2块置EP管中，80℃冰箱冻存用于羟脯氨酸测定，另2块制备成10％组织匀浆。另剪取颈部皮肤放入4％中性多聚甲醛溶液固定。 1．4指标测定：所用仪器有精密电子天平、Bi0680型酶标仪、匀浆机等。 1．4．1皮肤蛋白、羟脯氨酸(hydroproline，HPY)测量参照试剂盒(均购自南京建成生物工程研究所)说明书操作，用Bi0680酶标仪测定吸光度值(由北京中医药大学病理实验室提供)。 1．4．2血清透明质酸(hyaluronic acid，HA)送至北京北方生物工程研究所放免检测。 1．5皮肤组织学观察：4％中性多聚甲醛溶液固定皮肤组织石蜡包埋、切片、脱蜡、脱水、HE染色，光学显微镜观察。 1．6数据统计：统计后数据用x±s表示，进行方差齐性检验后用t检验进行多组均数的两两比较，方差不齐者用秩和检验。 2结果 2．1鼠血清透明质酸(HA)、皮肤蛋白及皮肤羟脯氨酸(HPY)比较：见表l～2。 模型建立后，小鼠皮肤蛋白降低，与其他各组相比有显著统计学意义(P 1