有菌条件下月季组织培养技术.docVIP

有菌条件下月季组织培养技术摘要介绍有菌环境条件下月季组织培养技术，包括培养基组成、培养瓶灭菌、灭菌培养基的制作、取材、材料处理、接种、培养、继代增值培养、生根培养、炼苗等方面内容，以为月季无性繁殖提供参考。 关键词月季；组织培养；有菌环境 中图分类号 S685.12 文献标识码B文章编号 1007-5739（2012）08-0216-01 月季属蔷薇科蔷薇属花卉，品种繁多，近100年来累计的品种数以万计，目前流行的有数千个品种，而且每年许多国家仍在不断选育新品种。现在许多国家都在用组织培养技术来繁殖月季的优良品种，目前这种快速繁殖方法技术成熟，已进行工厂化生产，对加速老品种的更新换代，迅速普及月季名优新特品种将起到重要的作用。月季常规组培技术报道很多，但在有菌环境条件下的月季组织培养技术未见报道。 1培养基组成 诱导萌芽培养基：MS+BA 0.5-1.0 mg/L+S106杀菌剂0.3 mL/L；增殖培养基：MS+BA 1-2 mg/L+NAA 0.1-0.2 mg/L+S106杀菌剂0.3 mL/L；生根培养基：1/2 MS+NAA 0.1-0.2 mg/L+IAA 1.0 mg/L（或NAA 0.5 mg/L） +S106杀菌剂0.3 mL/L。 2培养瓶灭菌 根据培养瓶的大小、数量，以浸没培养瓶及瓶盖为度，在水池或容器中量取适度的自来水，然后加入S105杀菌剂0.2 mL/L，搅拌均匀，放入洗净的培养瓶及盖浸泡2 h以上。然后捞取培养瓶及盖，将其倒扣在干净的工作台面上滤干水，待用。 3灭菌培养基的制作 以制取1 L培养基为例：量取1 L自来水放在电饭煲内加热（因加热蒸发加入母液后到分装时煮沸刚好是定容要求的1 100 mL，冷却后就是1 L，故配1 L培养基量取1 L自来水），称取白糖30 g、琼脂4 g，加入电饭煲锅水中，待全部溶解，再加入100倍MS母液（其中：大量元素A 10 mL、大量元素B 10 mL、铁盐10 mL、微量元素10 mL、有机物10 mL、1 mg/mL BA 0.5-1.0 mL），煮沸。用1 mol NaOH或HCl调pH值至 5.8，最后加入S106杀菌剂溶液0.3 mL，继续煮沸2-3 min使杀菌剂在培养基中混合均匀，再进行分装。 分装前拿起培养瓶使瓶口朝下用力甩净附着在瓶壁和瓶口的水珠，使瓶口朝上放在工作台面上，然后倒入培养基均匀分装，最后拿取培养瓶盖用力甩干瓶盖附着的水珠，扣在倒了培养基的瓶口上，待凝固接种。 4取材 在春季或秋季，连续的晴天上午露水干后，选取生长健壮的当年生半木质化、无病虫害的优良品种枝条带回实验室。除去枝条上的叶片和皮刺，切去枝条上端嫩茎和下端木质化的茎杆，选留中间半木质化、饱满未萌发的带腋芽茎段作外植体，切成长1 cm带腋芽的茎段[1-2]。 5材料处理 先用洗洁精少许滴入一个干净的瓶中，加入整理好的外植体茎段，加入占瓶体积2/3的自来水振荡洗涤5-6 min（也可把瓶子放在磁力搅拌器上搅动洗涤5-6 min），倒去瓶中带泡沫的水，找一块医用纱布扎住瓶口，放自来水龙头下，流水冲洗至无泡沫为止。 倒去自来水，把茎段转移到一个经S105杀菌液处理过的瓶中，倒入75%酒精浸泡8-10 s，倒入自来水，立即倒出瓶中水，再倒入自来水冲洗1次。倒出并滤干瓶中自来水，倒入0.1%升汞溶液振荡浸泡8-12 min（也可放在磁力搅拌器上搅拌浸泡8-12 min），时间从倒入升汞溶液至倒出升汞溶液加入自来水为止，加入自来水振荡洗涤每次不少于3 min，连续洗涤5-6次。 根据外植体数量，按100 mL凉开水加入S106杀菌剂0.5 mL的比例，制作外植体处理液。把外植体转移到此处理液中，处理液的体积为外植体的3-4倍，浸泡1.5-2.0 h（也可放在磁力搅拌器上搅拌浸泡1.5-2.0 h），待接种[3]。 6接种 镊子、剪刀经灭菌器灭菌或经酒精灼烧摊晾浸泡在75%酒精中，左手拿镊子，右手拿剪刀，用镊子从处理液中夹起外植体茎段，甩干附着在外植体上的处理液，用剪刀剪去带腋芽茎段两端接触杀菌处理液的断面，打开扣在培养基瓶盖按极性方向插入培养基，一瓶插1个茎段，扭紧瓶盖，把用过的剪刀、镊子重新浸泡在酒精瓶中。取出另一套剪刀、镊子重复操作直至全部接种完华。 7培养 把接种好的培养瓶用记号笔写上接种日期，转入培养室培养架上培养。培养室光照10～12 h/d，光强800～1 800 lx，温度20～23 ℃，最高24～26 ℃。培养20-25 d，当腋芽萌发至1-2 cm时，可进行继代增殖培养。在培养期间发现污染，应及时把污染瓶移出培养室。 8继代增殖培养 制作灭