影响猪卵母细胞体外成熟的若干因素.pdfVIP

一 184一 江苏农业科学 2008年第3期 影响猪卵母细胞体外成熟的若干因素 谭小东 ，王公金 ，周小龙 (1．南京师范大学／江苏医学分子生物学技术重点实验室，江苏南京210097；2．江苏省农业科学院畜牧研究所，江苏南京210014) 摘要：介绍了以屠宰场废弃的猪卵巢为材料，通过系统技术途径得到猪早期胚胎的基本方法。重点探讨了 不同发育阶段、不同培养系统、不同添加成分培养液以及不同培养时间等因素对猪卵母细胞体外成熟的影响，并 对其体外受精卵裂能力进行了比较与评价。结果表明，采用mTCM199作为体外成熟基础培养液，并添加直径5 8 mm卵泡的卵泡液(pFF)和雌二醇(E )，直径为2—8 mm的卵巢卵泡COCs经体外成熟培养40 h，可得到较 高的成熟率(66．7％)和体外受精卵裂率(29．2％)。本研究初步建立了猪2一细胞～4一细胞早期胚胎的体外批 量生产技术，可望进一步改进和完善后应用于养猪业科研与生产实践。 关键词：猪；卵母细胞；体外成熟；体外受精；卵裂率 中图分类号：$813 文献标志码：A 文章编号：1002—1302(2008)03—0184—03 利用屠宰场废弃的猪卵巢资源，通过卵巢卵母 层卵丘细胞的COCs。将COCs置于DPBS中，待体 细胞系统的体外成熟(IVM)、体外受精(IVF)和体 外成熟处理；捡卵后留下的pFF(直径分别为2～5 外发育获得猪胚胎的过程是开展猪种质资源保存、 mm、5～8 mm和2～8 mm的卵泡类群)经 1 500 育种、转基因药物、细胞克隆、复合体(COCs)发育机 r／min离心15 min，取上清液，经0．22 m滤膜过滤， 制等研究以及室内胚胎批量生产的关键技术体系。 一 20℃冷冻保存，备用。 近年来，猪卵巢卵母细胞体外成熟培养和体外受精 1．2 不同卵母细胞复合体的体外成熟培养系统 技术研究取得一定进展，但仍停留在研究阶段 。 1．2．1 不同培养液 卵母细胞体外成熟培养系统 猪卵巢卵母细胞体外成熟及其体外受精后支持发育 分别为2种，第一种为添加10％pFF(卵泡直径2～8 的能力都比体内差，这说明体外成熟培养环境还远 mm)、10％NCS、69 g／ml L—Cys、10 IU／ml PMSG、 未达到体内的生理水平 。卵母细胞体外成熟受 10 IU／ml HCG、1 g／ml 17 —E 以及双抗(青、链 到众多因素的调控，其调控机制十分复杂。体外成 霉素)各100 IU的改良TCM199培养液；第二种为 熟培养作为一项非常有发展前途的生物技术和畜牧 改良NCSU23培养液，成分与TCM199基本相同，不 业实用技术，其研究重点仍需放在探讨影响卵母细 同的是NCSV23液中以4 mg／ml BSA代替TCM199 胞体外成熟的各种影响因子及早期胚胎发育方面。 中10％NCS。选取胞质均匀、包被3层或4层以上 本研究重点探讨不同培养系统、培养时间以及不同 致密卵丘细胞、直径为2～8 mm的COCs，参照文献 发育阶段卵泡的卵母细胞对其体外成熟(极体排出 [3]条件进行体外成熟培养。 和细胞活力等)及体外受精的影响，为开展猪胚胎 1．2．2 不同卵泡液 在改良TCM199培养液中分 发育生物学和种质资源保存研究提供参考。 别添加浓度为10％的卵泡直径分别为2～4 mm、5 ～ 8 mm和2～8 mm的pFF，以不添加pFF为对照， 1 材料与方法 按1．2．1条件进行直径为2～8 mm的卵泡卵母细 1．1 卵巢卵泡COCs的采集和pFF制备 胞复合体(COCs)培养，比较不同