高效液相色谱法同时测定清热合剂各部位群中葛根素和黄芩苷的含量.pdfVIP

· 552 · 西堡药杂志2008年6月第37卷第6期 Shanxi Med j，June 2008，v01．37，N0．6 · 药物研究· 高效液相色谱法同时测定清热合剂各部位群中 葛根素和黄芩苷的含量 中国医科大学附属盛京医院(110004) 邱 枫 肇丽梅 孙亚欣 沈 阳 药 科 大 学 徐静华 清热合剂是由黄芩、葛根、大青叶等5味中药组成的 2．5 阴性样品溶液的制备：按全方比例分别称取除黄芩或 一 个传统方剂，经药理实验 l_3]和我院多年临床实践证明 葛根外其他3味药适量，按粗提物制备工艺制得缺黄芩和 其具有确切的疗效。目前该药的剂型为合剂，剂型较落后， 葛根的阴性样品，按“2．4”项下方法制备阴性样品溶液。 因此我们在前期工作基础上[“ ]通过大孔吸附树脂对其进 3 方法与结果[4-8j 行了分离纯化，确定其有效部位群。该方剂的君药和佐药 3．1色谱条件：色谱柱Diamonsil Cl8色谱柱(150 rnrn× 分别为黄芩和葛根，所以择黄芩苷和葛根素作为质量控制 4．6 rnrn，5 tan)；流动相：A(甲醇)，B(0．2％磷酸溶液)，二 指标。本文建立同时测定葛根素和黄芩苷的高效液相色谱 元梯度洗脱，梯度洗脱条件为：0--6 rain：vA／＼侣=33／67；6 法(卜玎PLC)，并将其应用于清热合剂各部位群中葛根素和 -- 7 min：VA／VB=33／67_+60／40；7～13 min：VA／vB：60／ 黄芩苷的含量测定，为筛选有效部位群提供依据。 40；13--14 mln：VA／VB=60／40--~33／67，洗脱流速为1．0 1 仪器与试药 mL／min，紫外检测波长为0～7 min：250 nrn一7～15玎lin： HP1100系列高效液相色谱仪(美国安捷伦科技公司)。 280 nm，柱温为3O℃。 大孔吸附树脂(型号：HPD100，沧州宝恩化工有限公司)。 3．2 标准曲线的制备：精密吸取上述对照品溶液 1．0， 葛根素(puerarin)对照品(中国药品生物制品检定所，供含 2．0，4．0，8．0，12．0，16．0 vL注入高效液相色谱仪中。按 量测定用)；黄芩苷(baicalin)对照品(中国药品生物制品检 照上述色谱条件测定峰面积，以峰面积为纵坐标，对照品的 定所，供含量测定用)；清热合剂各部位群由作者提取纯化 进样量( g)为横坐标，绘制标准曲线，得葛根素和黄芩苷的 得到；甲醇(色谱纯)，磷酸(分析纯)，水(二重蒸馏水)。 标准曲线分别为：C=4 508．9A+6．359 3(，-=0．999 8)；C 2 溶液的配制 =3481．2A一34．049(，-=0 999 8)。表明葛根素在0．025 2 1对照品储备液的制备：分别精密称取葛根素或黄芩苷 -- 0．4 tzg范围内、黄芩苷在0．25--4 tzg范围内与其峰面积 对照品5 mg，置1O n1L容量瓶中，加甲醇超声溶解，定容至 呈良好的线性关系。 刻度，摇匀，即可得浓度为0．5 g／L的葛根素对照品储备液 3 3 空白干扰试验：取阴性样品溶液、对照品溶液和供试 或黄芩苷对照品储备液A。再精密称取黄芩苷对照品25 品溶液在上述色谱条件下各进样1O (对照品溶液进样4 mg，置1O mL容量瓶中，加甲醇超声溶解，定容至刻度，摇 L)，得HPLC图谱，结果在“3．1”条件下，阴性样品溶液对 匀，即得浓度为2．5 g／L的黄芩苷对照品储备液B。 供试品溶液含量测定无干扰，葛根素和黄芩苷的保留时间 2．2 对照品溶液的制备：分别精密吸取葛根素对照品储备 分别为5．7和l2．4 min。 液