复方白花前胡液抗大鼠脑缺血再灌注损伤的相关实验分析.pdfVIP

复方白花前胡液抗大鼠脑缺血弭灌注捌伤的相关实验研究 中文摘要 缺血性脑卒中以其高发病率、死亡率、致残率严重危害人类健康，己 成为当代人类三大疾病死亡原因之一。缺血性脑卒中是脑血管病危急重症 之一，急性期起病急骤，此期救治对提高抢救成功率和病后生存质量具有 重要意义…。缺血性脑卒中后梗塞灶周围水辨压迫脑组织导致循环血流下 降形成梗死灶周围缺血半暗带。凋亡是缺血半暗带神经细胞死亡的主要形 式，抑制神经细胞凋亡可以减轻缺血半暗带的损伤，挽救濒死神经细胞， 改善缺血性卒中预后。因此，如何减轻脑梗死后神经细胞凋亡的发生发展 是脑血管病研究中的蕈点和难点所在。 中医认为中风病妁基本病机为本虚标实，病位在脑。；}夹血性脑卒中发 生的主要病因病机在于患者平素气血亏虚，心、肝、肾三脏阴阳失调，加 之忧思恼怒，或外邪侵袭等诱因，导致气血运行受阻，肌肤筋脉失于濡养， 或阴亏于下，阳盛于上，蒙蔽清窍，阴阳不相维系所致。吾师涂晋文教授 强调缺血性脑卒中的根本病机为因虚致瘀，其病理环节是正气耗损，脑脉 瘀滞，其病位在脑，病性为本虚标卖。虚者，是气虹、津液、精髓之不足； 瘀者，乃血瘀、痰浊之类。因此，拟定了益气活血、化痰通络的中药复方 白花前胡液，以神经细胞凋亡为切入点，通过在体和体外细胞培养实验， 以整体器官功能，病理组织改变及细胞和分子生物等三个层次系统，研究 复方白花前胡液的脑保护作用及其可能机制。 第一部分复方白花前胡液对脑缺血再灌注大鼠神经功能缺损及组织病理 学改变的影响 采用线栓法制作大鼠大脑中动脉脑缺血再灌注模型，设立假手术组、 模型组、复方白花前胡液太，中、小剂量治疗组，造模动物清醒后印刻给 药，于第3日观察各项指标。 结果表明，各剂量治疗组与模型组相比梗死面积显著缩小，以大剂量 实验组最明显(PO．0I)；各剂量治疗组动物神经功能钦损症{夭也有不同程 度改善，与模型组相比有显著性差异，提示复方白花前胡液具有减少梗死 面积及改善神经功能缺损的作用， 假手术组皮层神经元形态结构正常；对照组大鼠缺血侧大脑度层神经元呈 缺血性改变，大量神经元变性坏死、出现空沲，表现为胞体缩小呈三角形， 胞浆为伊红性，核固缩深染，核仁消失等。海马CA，区排列稀疏紊乱，有 不同程度神经元丢失现象；复方白花前胡液组缺血侧皮层衲经细胞亦里缺 血改变，但只有部分细胞固缩，且深染程度较轻，细胞无缩小，细胞周围问 隙改变不明显。海马CAl区排列较整齐，神经细胞数日较多，提示复方白花 前胡液能够明显改善脑缺血再灌注模型大筑酗组织病理变化。 复方白花前胡液抗大鼠脑缺m再灌注损伤的相关实验研究 第二部分复方白花前胡液对脑缺血再灌注大鼠神经细胞凋亡的影响 大鼠脑组织石蜡切片采用原位末端标记(TUNEL)法检测神经细胞凋 亡。结果表明模型组TUNEL染色阳性颗粒显著增多，凋亡神经细胞从病灶 中心到缺血半暗带区均有发生，尤以半暗带为多。脑缺血再灌注3日后， 平均神经细胞凋亡率为38．5％；复方白花前胡液大、中、小剂量组3d凋亡 率均有减少，分别为22．2％、24．1％、32．7％，与模型组比较差异均具有显 血再灌注模型大鼠神经细胞凋亡。 第三部分 复方白花前胡液对脑缺血再灌注大鼠神经细胞凋亡相关基因 Bcl-2、Bax、Caspase一3蛋白水平的影响 大鼠脑组织石蜡切片采用免疫组化染色法检测凋亡调控基因bcl一2， 性染色细胞数较假手术组明显增高(Pco．01)，复方白花前胡液大、中剂量 表达有关。 第四部分复方白花前胡液对拟缺血诱导的神经细胞凋亡及其机制研究 培养的海马神经细胞，分为正常组、模型组、复方白花前胡液大、中 观察细胞形态，荧光染色法流式细胞仪检测细胞凋亡率，并分别检测乳酸 脱氢酶含量及细胞游离钙的含量。倒置相差显微镜下，正常组细胞贴壁良 好，分布均匀，结构清晰，胞体呈锥形或多极形，突触伸长，突触间联系 密切；模型组细胞贴壁不良，肿胀变形，部分细胞胞浆内出现大小空泡。 治疗组与模型组细胞病理结构变化较模型组有显著减轻。 组在不同时点LDH释放率与模型组相比有显著降低(P0．051，提示复方白 花前胡液能使神经细胞具有抗缺氧／缺糖损伤作用。 流式细胞仪检测结果显示，正常培养的海马神经细胞凋亡率为9。2％， 缺氧／缺糖培养3h和复氧复糖24h，模型组细胞凋亡率为42．7％，复方白花 前胡液中、高浓度实验组细胞凋亡率分别