优化醋酸钾(KAC)法提取蚜虫基因组DNA.docxVIP

安徽农业科学，JournalofAnhuiAgri．Sei．2009，37(10)：4394—4395，4398责任编辑常俊香责任校对吴晓燕优化醋酸钾(KAC)法提取蚜虫基因组DNA赵丽娟1，漆永红2，刘永刚2，张正英1*(1．甘肃农业科学院生物技术研究所．甘肃兰州730070；2．甘肃农业科学院植物保护研究所，甘肃兰州730070)摘要[目的]探索一种简便、有效的单头蚜虫基因组DNA提取方法，[方法]以从不同地区采集的桃蚜为试材，采用改进的KAC法和优化的KAC法提取单头桃蚜的基因组DNA．用紫外分光光度计测定所提DNA的浓度(以0D，瑚，，。表示)，用0．8％琼脂糖凝胶电泳检测所提DNA的纯度，比较2种方法的提取效果；对优化KAc法所提DNA进行PcR扩增和电泳检测．，[结果]优化KAC法提取的单头蚜虫基因组DNA的0DⅫⅫ为1．6一I．9，浓度为20～50ng／g；改进KAC法提取的单头蚜虫基因组DNA的OD。捌l为I．4一I．7，浓度为8—25ns／g；来自同一地方桃蚜的基因组DNAPCR扩增产物的电泳条带基本相同。[结论]优化改进的KAC法提取的桃蚜基因组DNA浓度和纯度均较高：关键词基因组DNA：桃蚜；提取方法；优化中图分类号S188文献标识码A文章编号0517—66lI(2009)10—04394—02ExtractionofGenomeDNAofAphidbyOptinazedPotassiumAcetate(KAC)ZHA0Li-juanetal(InsitituteofBio．technique，GansuAcademyofAgriculturalScience。Lanzhou．Gansu730070)AbstractObjective]TheaimwastoexploreasimpleandeffectiveextractionmethodforextractinggenomeDNAofsingleaphid．[Meth一0dWithpeachaphidsfromditierentareasasthetestedmaterials．theimprovedKACmethodandoptimizedKACmethodweremkentoex·tractthegenomeDNAofsingleaphi如．Theconcn．ofobtainedDNA(OD260／m)wasdeterminedbyultravioletspectrophotometeranditspuri-tyWagdeterminedby0．8％agarosegelelectrophoresis．Theextractioneffe(·tsof2methodswerecompared．鸭eDNAobtainedbyoptimizedKAcmethodwaft,amplifiedwithPcRanddetectedbyelectrophoresis．[Result]，rIle0DⅢmofsingleaphidsgenomeDNAextractedwithop-timizedKACmethodWaS1．6一1．9anditsconon．was20一50ng／g．111POD260删ofsingleaphidsgenomeDNAextractedwithimprovedKACmethodWag1．4一1．7andiItsconcn．WaS8—25ng／g．TheelectrophoresisstripofPCRamplificationproductsofsingleaphidsgenomeDNAfromthe．＆ⅡneareaWSsimilaJ：lConclusionThe【-uⅢ．n．andpurityofaphidsgenomeDNAextractedwithoptimizedKACmethodwereIli对聊． I【eywordsGe∞IlleDNA：Peachaphid：Extractionmethod；Optimizadonl材料与方法 蚜虫(Aphidinea)为同翅目(Homoptera)蚜总科(Aphidoidea)和球蚜总科(Adelgoidea)昆虫，世界已知4700余种‘“，我国1．1材料蚜虫资源丰富，已知的有l000余种旧’。大多数蚜虫为重要1．1．1样品采集与保存。供试桃蚜(Myzuspersicae(Sulzer))的农林经济植物害虫”1，但也有少数种类的蚜虫如五倍子蚜于200r7～2008年采自甘肃省武威市、定西市、天水市等13个(Schlechtendaliachinensis(Bell))是具有较高经济价值的资地区的马铃薯植株。将从各地区采集的有翅蚜和无翅蚜分源昆虫HJ。桃蚜(Myzuspersicae(Sulze