硫化砷对骨髓增生异常综合征骨髓单个核细胞体外凋亡的作用论文.docVIP

　　硫化砷对骨髓增生异常综合征骨髓单个核细胞体外凋亡的作用论文 .freelg/L）的硫化砷对MDS细胞无明显抑制作用；②相对高浓度的硫化砷（1.5-50 mg/L）对低危组MDS以及高危组MDS的单个核细胞均有诱导凋亡作用，且呈时间浓度依赖关系；bcl-2 mRNA 在As2S2 作用后表达明显下调.freel MDS Patients Induced by Arsenic Sulfide Abstract The aim of this study MDS patients and to explore its possible cellular and molecular mechanisms．The apoptosis of MDS cells induced by As2S2 solution of different concentrations etry，and RT-PCR.The results shog/L）had no marked inhibition effect on proli-feration of MDS cells；(2) after treatment g/L of As2S2，both loanner，the expression of bcl-2 mRNA and the ratio of bcl-2/bax obviously decreased after As2S2 treatment (P 0.05); (3) BMMNC from MDS patients had higher apoptosis ratio than that of BMMNC from control.It is concluded that BMMNC excessive apoptosis exists in MDS patients; log/L） shog/L） induces apoptosis of MDS cells. Key yelodysplastic syndromes ;arsenic sulfide; BMMNC; apoptosis; bcl-2; bax 骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes，MDS)是一种造血干细胞异常克隆性与异质性疾病，其主要特征为病态造血和无效造血，部分患者易向白血病转化。MDS发病率有逐年上升趋势［1］，但目前对其治疗仍无很好的方法。经研究发现，砷剂具有致癌、致畸、致突变的协同作用；作为微量元素，砷尚能促进造血、细胞生长和繁殖［2］。硫化砷（As2S2）是中药雄黄的主要成分，近年来，用雄黄治疗MDS取得了一定的疗效［3］，本研究以观察硫化砷（As2S2）在体外对MDS骨髓单个核细胞的作用，查明其可能的治疗机理，开发其应用领域。 材料和方法 病例选择 MDS患者25例，按照FAB分型［4］，RA 15例，RAS 3例，RAEB 5例，RAEB-t 2例。男性16例，女性9例，中位数年龄45（19-80）岁，为初诊及复诊的患者，每例均经骨髓细胞形态学和骨髓病理等相关的实验室检查确诊。以上病例来自南通大学附属医院血液科。 标本采集和细胞分离 自髂后上棘抽取5 ml骨髓液，0.1%肝素抗凝，采集后2小时内用淋巴细胞分离液密度梯度离心分离骨髓单个核细胞，RPMI 1640培养液洗3遍，制成细胞悬液，计数备用。 试剂 硫化砷（As2S2）购自美国Sigma公司，纯度99.99%，以0.2 mol/L NaOH 溶解，HCl中和滴定至pH 7.35-7.45，制成0.1%的储存液，4℃保存。MTT购自美国Sigma公司，临用前以PBS配制成5 mg/ml，抽虑除菌，保存在4℃条件下。RT-PCR试剂盒购自晶美公司，AnnexinV FITC试剂盒购于联科生物公司。 MTT增殖抑制实验 硫化砷分成7种不同浓度（0.3、0.6、1.5、3.0、15、30、50）mg/L组，加上调零孔（没有细胞和药）和对照孔（不加药），共为9组，每组设5个复孔。分离的骨髓单个核细胞以每孔1 000-10 000个接种到96孔板，每孔体积200 μl，培养液为含不同浓度的硫化砷的RPMI 1640（含10%胎牛血清、100 U/ml青霉素、100 mg/ml链霉素）；37℃，5% CO2条件下分别培养24、48、72小时，每孔再加入MTT 20 μl，孵育4小时，小心弃上清，加二甲亚砜150 μl振荡溶解10分钟，用酶标仪测490 nm波长A值，取5孔A490的均值，计算抑制率。抑制率=（阴性对照的A值-实验孔的A值）/阴性对照的A值×100%。 流式细胞术检测 分离的骨髓单个核细胞以（2-5）×105/mL浓度接种在含硫化砷的