硫氢化钠后处理对培养心肌细胞缺氧-复氧损伤的保护作用论文.docVIP

　　硫氢化钠后处理对培养心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用论文 【关键词】 硫化氢 后处理 心肌细胞培养 缺氧 复氧损伤 大鼠 Abstract： Objective To explore the protective effects of H2S donor-NaSH postconditioning on the primary-cultured neonatal rat myocardial cells exposed to hypoxia/reoxygenation （H/R） injury. Methods Primary- cultured myocardial cells from neonatal rats ly divided into 4 groups: control group（normal）, hypoxia/reoxygenation group（H/R）, hypoxia postconditioning group（HPC） and NaHS postconditioning group（H/R+NaHS）. A model of H/R injury utase (SOD), and the content of malondialdehyde (MDA) ined at the points of pre-hypoxia, hypoxia for 2 h and reoxygenation for 0.5 h ,1 h and 2 h. Results No obvious changes mol·g-1 and （0.986±0.042） mmol·g-1 vs （1.120±0.045） mmol·g-1, P﹤0.05］; but the SOD activity ained higher than in the H/R group,.freelyocardial cells against hypoxia/reoxygenation injury by enhancing the scavenging of oxygen - derived free radicals. Key yocardial cell culture; hypoxia/reoxygenation injury; rat 缺血后处理(ischemic postconditioning)［1］是可以有效对抗缺血/再灌注损伤的一种重要内源性保护机制，长时间缺血后再灌注前，短时间内反复短暂的再缺血处理，可以明显减轻缺血组织的缺血/再灌注损伤。药物后处理是用药物模拟缺血后处理的方式，试图达到与缺血后处理相似的保护效果。内源性硫化氢（H2S）作为新发现的气体信号分子，其心肌保护作用近年来受到高度的关注。研究发现，缺血前给予外源性硫化氢钠（NaHS）可改善因缺血/再灌注损伤（ischemia reperfusion injury, IRI）引起的心肌功能障碍和心肌损伤［2］。但NaHS后处理的心肌保护作用尚未见报道。本研究采用原代培养的大鼠乳鼠心肌细胞.freelerica）；胶原酶I、胰蛋白酶（Sigma）；乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)、超氧化物歧化酶(super oxidedismutase, SOD)、丙二醛 (malondialdehyde, MDA)试剂盒，考马斯亮蓝法蛋白测定试剂盒均由南京建成生物工程研究所出品；其余试剂均为国产分析纯产品。二氧化碳培养箱（上海），N750紫外分光光度计（上海）。 1.2 实验方法 1.2.1 乳鼠心肌细胞原代培养 选出生1～3天内的Sprague Daal组）：将心肌细胞放入37℃含95%空气、5% CO2的二氧化碳培养箱中，用复氧液〔mmol·L-1, 0.9 Na2HPO4，20.0 NaHCO3, 1.8 CaCl2，1.2 MgSO4, 55.0 葡萄糖, 20.0 HEPES(hydroxyerhyl piperazine erhanesulfonic acid, 羟乙基哌嗪乙磺酸)，129.5 NaCl和5.0 KCl，pH 7.4〕培养4 h。②缺氧/复氧组（H/R组）:参照文献［3］，将心肌细胞换用高纯氮气饱和30 min、氧分压低于7 kPa的模拟缺氧液(mmol· L-1，0.9 Na2HPO4、6.0 NaHCO3、1.8 CaCl2、1.2 MgSO4、40乳酸钠、20 HEPES、98.5 NaCl和10.0 KCl、pH 6.8)，并置于37℃含95% N2、5% CO2的密闭容器中缺氧2 h，然后换为复氧液在二氧化碳培养箱中复氧2 h。③缺氧后处理组（HPC组）：缺氧2 h后，参照文献［4］方法