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蛋白质的分离纯化和相对分子量的测定
二、蛋白质的分离纯化方法 （一）根据分子大小不同的纯化方法 1、透析和超过滤 3 凝胶过滤 凝胶过滤层析也称分子筛层析、排阻层析。是利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，根据被分离物质的分子大小不同来进行分离。层析柱中的填料是某些惰性的多孔网状结构物质，多是交联的聚糖(如葡聚糖或琼脂糖)类物质，小分子物质能进入其内部，流下来速度慢，而大分子物质却被排除在外部，下来的速度快，当一混合溶液通过凝胶过滤层析柱时，溶液中的物质就按不同分子量筛分开了。 （二）利用溶解度差别的纯化方法 1.等电点沉淀 调整溶液pH 不同蛋白在各自 pI处依次沉淀 2.盐溶和盐析 （三）根据蛋白质带电性质分离 1 电泳 各种蛋白质都有其特有的等电点，在高于其等电点PH的缓冲液中，将形成带负电荷的质点，在电场中向正极泳动，在同一条件下，不同蛋白质带电荷有差异，分子量大小也不同，所以泳动速度不同 。 （三)根据电荷不同的分离方法—电泳 原理： 蛋白质在非等电点时所带总电荷不为0 分子大小不同，电场中移动速度也不同 2 离子交换层析 （四）利用蛋白质选择性吸附的性质 羟磷石灰层析 疏水作用层析 （五）利用对配体的特异生物学 亲和力的纯化方法 六、蛋白质含量测定和纯度鉴定 （略） 蛋白质的分离纯化 一、蛋白质分离纯化的一般原则 总目标：增加制品纯度或比活 1.预处理：因动/植物/细菌而异 2.粗提：采用盐析/等电点沉淀/有机溶剂等方法将蛋白质沉淀。 3.精制：采用电泳技术和层析技术是不同蛋白质分离。 4.结晶 利用蛋白质分子不能透过半透膜将其 与小分子物质分开 半透膜为玻璃纸或纤维素材料 血液透析 小分子溶出 小分子被带出 透析机 透析液 加压 血液 2、密度梯度（区带）离心 60000~80000转/分 重力60万～80万倍 3、凝胶过滤 3.有机溶剂分级分离法 降低介电常数 争夺水化膜 等电聚焦电泳 双向电泳 离子交换层析 亲和色谱颗粒 具有极强的专一性
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