兔血清白蛋白及其耐热肠毒素偶联物的制备.pdfVIP

云南畜牧兽医(2017年第1期) 1 ■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■ 试 验 研 究 兔血清白蛋白及其耐热肠毒素偶联物的制备 雷燕 (梁河县畜牧站,云南　 梁河　 679200) 摘要:耐热肠毒素(STa)是产肠毒素大肠杆菌(ETEC)引起仔猪黄白痢的关键毒力因子,但其 本身在动物体内无免疫原性。 本试验为制备基于STa 的完全抗原,首先采用利凡诺沉淀法纯化兔 血清白蛋白(RSA),以RSA 为载体,以戊二醛为交联剂,采用两步交联法制备STa与RSA 的共价偶 联物,再经凝胶电泳(SDS )鉴定偶联效果,测定偶联物分子量及偶联比。 电泳结果显示 RSA及其STa偶联物制备获得成功,偶联物呈单一条带,分子量约为108．5 KDa,STa 与RSA偶联 比(摩尔比)为20．5∶1。 本试验结果可为制备抗STa特异性抗体、研发STa检测试剂盒、筛选STa 减毒突变体及发展仔猪黄白痢类毒素疫苗提供必需的实验材料。 关键词:耐热肠毒素(STa);兔血清白蛋白(RSA);戊二醛两步交联法;十二烷基硫酸钠-聚丙 烯酰胺凝胶电泳(SDS) 中图分类号:S852．5　 　 文献标志码:A　 　 文章编号:1005-1341(2017)01-0001-04 　 　 已知多数大肠杆菌(Escherichia coli)是人与动 作STIb。 它们都能与靶细胞膜上的特异性受体结 物肠道的正常菌群组分之一,但有些大肠杆菌有致 合,活化鸟苷酸环化酶,通过cGMP途径影响细胞生 病性或在机体抵抗力低下时有致病性,称为致病性 理功能而导致腹泻。 从腹泻患畜粪便中分离到的 大肠杆菌。 致病性大肠杆菌至少可以分为5 种,即 [6] ETEC都产生STa 。 产肠毒素大肠杆菌(ETEC)、产类志贺毒素大肠杆 STa分子量小,抗原性极差,甚至无抗原性,因 菌(SLTEC)、肠致病性大肠杆菌(EPEC)、肠出血性 此被视为半抗原。 近年来发现将其与蛋白载体如牛 大肠杆菌(EHEC)和尿道致病性大肠杆菌(UPEC)。 血清白蛋白(BSA)共价偶联或用戊二醛聚合后免疫 仔猪黄白痢就是由ETEC 引起的、严重危害养猪业 动物,均呈现免疫原性。 Dreyfus等发现猪STa抗血 的顽固性传染病,尤其是在规模化养猪场,由于其养 清能与牛源及人源STa反应,说明这些STa至少具 [1] [7] 殖密度增高而普遍存在 ,发病率和死亡率分别高 有一个相同的抗原决定簇 。 [2] 达56．2%和24．7% 。 ETEC还可引起人(婴儿及 由于STa是ETEC引起仔猪黄白痢的关键毒力 旅行者)的急性腹泻。 因子,研究 STa 的毒性、抗原性、致病机理及检测方 引起仔猪黄白痢的ETEC菌株血清型众多,且 法,对预防、诊断和治疗该病具有重要的现实意义。 [3] 耐药性日益增加 ,长期使用抗生素及抗菌化学药 研制STa类毒素疫苗可能是防治仔猪黄白痢最有效 物,将造成药物残留、猪肉品质下降等问题。 尽管使 的对策。 但 STa无免疫原性,只有将其与特定载体 用大肠杆菌地方流行菌株制备的多价苗有一定预防 通过基因融合表达或化学共价偶联才能成为完全抗 [4] 效果 ,但效果仍很有限。 如何防治仔猪黄白痢, 原。 已成为养猪业发展的重要课题。