骨形成蛋白9于2型糖尿病时在肝组织中的表达.docVIP

　　骨形成蛋白9于2型糖尿病时在肝组织中的表达 【摘要】 目的 研究 2型糖尿病鼠肝组织骨形成蛋白9（bone morphogeic protEins9，BMP9）基因转录及蛋白表达的变化。 方法 将大鼠随机分为2型糖尿病模型组与正常对照组，分别于造模后5、10、20 d处死，以RTPCR及P9基因转录及蛋白表达水平进行检测与 分析 。结果2型糖尿病模型组BMP9基因转录及蛋白表达水平与正常组相比均显著性降低（P＜0.05）；并且2型糖尿病大鼠5、10、20 d处死组BMP9基因转录及蛋白表达水平呈逐步下降趋势。结论2型糖尿病大鼠肝组织BMP9基因转录及蛋白表达水平较正常显著降低，这一变化可能与2型糖尿病的发生 发展 相关。 【关键词】 骨形成蛋白9 2型糖尿病 肝组织 Expressions of bone morphogeic protEIns9 in liver tissue of type 2 diabetic rats Abstract: Objective To study changes of bone morphogeic proteins (BMP)9 gene transcription and protein expression in liver of type 2 diabetic rats.MethodsTotally 20 P9 gene transcription and protein expression in liver odel group al control group（P＜0.05）. Conclusion The BMP9 gene transcription and protein expression in liver of type 2 diabetic rats are significantly loay be associated ellitus. Keyorphogeic proteins9; type 2 diabetes mellitus; liver tissue 糖尿病以胰岛素绝对或相对缺乏引致各种代谢紊乱为主要特征，其病因尚未完全阐明。随着研究的逐步深入，越来越多的致病因素纳入了研究者的视野。近期，通过高通量功能基因组筛选，Groop等发现骨形成蛋白9（bone morphogeic proteins9，BMP9）与糖、脂代谢过程中某些关键酶的表达调控相关，提示BMP9可能是一种新的代谢调节因子［1］。据此推测，BMP9编码基因也许是糖尿病发生过程中被忽略的又一重要因素，研究其与糖尿病的关联具有重要的意义。本研究以2型糖尿病大鼠为模型，初步探讨2型糖尿病鼠肝脏中BMP9基因表达的变化及其意义。 1材料与方法 1.1动物和试剂 Isolation Reagent Kit（Boehringer Mannheim公司）、BIORAD凝胶电泳装置及凝胶扫描分析系统（美国）、抗大鼠BMP9单克隆抗体（Dr.Harvery惠赠）、二抗购自Southern Biotechnology公司。 1.2模型制备 Isolation Reagent Kit，按试剂盒说明书进行，所有反应均以βactin为内参照，并处于同一扩增条件下。引物序列如下：βactin上游5’GCATG GGTCAGAAGGAT3’，下游5’AAGGAAGGCTGGAAGAG3’；BMP9上游5’TCCCCACCGACTTGTTCTTC3’，下游5’GAGAGTCAGCTGGGAGCTTGA3’。反应产物于15 g/L琼脂糖凝胶电泳，BIORAD凝胶扫描分析，以目的基因与βactin扩增产物电泳条带亮度面密度比值定量BMP9基因转录水平。 1.5P9单克隆抗体（稀释度1∶2 000），室温反应2 h，弃封闭液与抗体，TTBS洗3次，每次10 min，加适量二抗（稀释度1∶5 000），室温反应1 h，TBS洗4次，每次5 min，ECL显色。 1.6统计学分析 采用SPSS 10.0分析软件，数据用均数±标准差（±s）表示，采用方差分析及均数间比较，显著性差异标准P＜0.05。 2结果 2.1一般情况 20只大鼠实验过程中均未死亡，全部进入结果 分析 。 2.2血糖水平变化 各组大鼠不同时期血糖水平见表1。由表1可见，与造模前比较，正常对照组造模后和处死前血糖均未升高，差异无显著性意义（P＞0.05）；5、10、20 d处死组造模后和处死前血糖均升高，差异有显著性意义（P＜0.05）。可认为2型糖尿病模型组在造模后不同时期血糖水平与造模前比较均有显著性差异，且均高于11.1 mmol/