骨桥蛋白在乳头状甲状腺癌中的表达及意义.docVIP

　　骨桥蛋白在乳头状甲状腺癌中的表达及意义 作者：孙咏梅　刘韶平　马喆　王正滨　吴俐 【摘要】 目的：通过mRNA和蛋白质水平检测乳头状甲状腺癌组织中骨桥蛋白（osteopontin，OPN）的表达,探讨其与甲状腺癌发生、 发展 的关系。方法：收集48例新鲜的乳头状甲状腺癌组织，采用实时荧光定量PCR法检测OPN mRNA的表达，通过免疫组织化学方法检测组织中OPN的表达。30例甲状腺良性病变及20例正常甲状腺组织作为对照。结果：乳头状甲状腺癌组织中OPN mRNA的表达水平为56.82±49.16,高于甲状腺良性病变组织（19.72±28.56）及正常甲状腺组织（13.76±20.65）。免疫组织化学结果表明,OPN主要定位于癌细胞的细胞质，OPN蛋白表达结果与mRNA基本一致。OPN mRNA的表达与乳头状甲状腺癌的瘤灶数目、瘤体大小、肿瘤淋巴结转移及肿瘤临床分期无明显相关性（Pgt;0.05）,病理发现砂粒体的乳头状甲状腺癌OPN mRNA的表达高于未发现砂粒体者（Plt;0.05）。结论：OPN在乳头状甲状腺癌中的表达高于甲状腺良性病变及正常甲状腺组织。乳头状甲状腺癌OPN mRNA的表达量与病理砂粒体的存在相关。OPN在乳头状甲状腺癌的发生、发展中发挥一定作用。 【关键词】 甲状腺肿瘤·骨桥蛋白·聚合酶链反应 【ABSTRACT】 Objective： To investigate the expressions of osteopontin in human thyroid papillary carcinoma. Methods： Forty-Eight fresh samples of thyroid papillary carcinoma RNA and protEIn munohistochemical staining respectively. Thirty samples of thyroid benign lesions and 20 samples of normal thyroid tis　sues RNA and protein in thyroid papillary carcinoma bers, tumor size, lymph metastasis and TNM stage）. The expression levels of OPN mRNA moma bodies in tumor tissue. Conclusions： The expression levels of OPN in thyroid papillary carcinoma al thyroid tissues. The expression levels of OPN mRNA moma bodies in tumor tissue. OPN may play a role in the development of thyroid papillary carcinoma. 【KEY 分期（参照UICC1987年分期标准）：Ⅰ～Ⅱ期33例，Ⅲ～Ⅳ期15例。另选取同院同期甲状腺良性病变组织标本30例，其中男11例，女19例，年龄21～71岁，平均年龄45.2岁，中位年龄43岁，包括结节性甲状腺肿23例，甲状腺腺瘤7例；正常甲状腺组织20例，取自良性病变周围组织。所有患者术前均未接受放、化疗及其他药物治疗。所有标本均在手术切除后半小时内处理完毕，每例标本均分成两份,一份用4%甲醛固定,作常规病理及免疫组织化学染色，另一份置于-80℃液氮罐中。 1.2　主要试剂　PCR引物及探针：从PUBMED/Nucleotide GenBank中查出OPN基因全序列，以GAPDH基因序列作为内参照，应用Primer Premier 5.0软件，设计引物。经预实验后，确定探针序列，由上海生物工程技术服务有限公司合成。OPN 5’端引物序列5’-AGGACTCCATTGACTCGAACGA-3’, 3’端引物序列为5’-CACCTCGGCCATCATATGTGT-3’，扩增产物长度为183 bp。OPN Taqman探针序列：5’-ACGGACCTGCCAGCAACCGAAGTT-3’；内参照基因采用葡萄糖磷酸脱氢酶（GAPDH） , 5’端引物序列为5′-ACTCTGGCAAAGTGGATGTTGTC-3′, 3’端引物序列为5′-GCATCACCCCACTTGATGTTG-3′，扩增产物长度为150 bp。GAPDH Taqman探针序列为5-ATGATTCCACCCACGGCAAGTTCCA-3。荧光定量PCR两步法试剂盒购自大连宝生物工程有限公司，RNA提取试剂盒购自上海生物工程技术服务有限公司，鼠抗人