一种新的海洋微藻病毒丝氨酸蛋白酶基因的克隆表达及其活性分析.pdfVIP

第??卷 第?期? 海? 洋? 学? 报? ???．??，??．?? ????年 ?月? ????????????????????????? ???????????? 李丽华 ，邱健健 ，蔡艺钦 ，等．一种 新的海洋 微藻病 毒丝氨 酸蛋 白酶基 因的克 隆表达及其 活性分析???．海 洋学报 ，????，?????：? ???— ???，???：??．????／?．????．????—????．????．??．???? ???????，????????????，?????????，?????．???????，????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????? ????．???????????????????????????????????，????，?????：???— ???，???：??．????／?．????．????—????．????．??．???? 一 种新 的海 洋微 藻病 毒 丝氨酸 蛋 白酶 基 因的? 克 隆表达及 其活 性分 析? 李丽华? ，邱健健? ，蔡艺钦? ，于鹏? ，刘静雯? ??．集美 大学 食 品与生物工程学 院，福建 厦 门 ??????；?．福建省高校食 品微 生物与酶工程技术研究 中心 ，福建 厦 门? ???????? 摘要 ：从 海洋球石 藻 ?????????????????病 毒 ???????的基 因组 中克 隆 了丝 氨 酸 蛋 白酶 ????基 因? ????????登 录号 ：?????????，对 该基 因的开放 阅读框 ?????进行 系统 的生物信 息学分 析 ，并在 大肠? 杆菌 中融合 表 达 ，通 过 亲 和 层 析 法获 得 了纯 化 的重 组 ??。结 果 表 明：???????一??基 因 的 ???为? ????????，编 码 ???个 氨基酸 ，蛋 白相对分 子质 量为 ??．?????；该 基 因片段 与 ???????中 ????????的? 同源 性很高 ，核苷 酸及其对 应的氨基 酸序列 同源性分别 为 ??? 和 ??? ，而与其他 物种 ??序列 的 同源? 性仅 为 ??? ～??? ，说 明其 可 能是 丝 氨 酸 蛋 白酶 家族 中 的一 个 新 成 员 ；预测 的二 级 结构 特 征 显 示? ???????一??的蛋 白结构域 中具有典 型 的 ???????组 氨酸 活 性位 点 区域 ?和 ?????????????丝? 氨酸 活性位点 区域 ?两个 丝氨酸蛋 白酶催 化 活性 位点 的氨基 酸基 序 ，是 一个 两次 跨膜 蛋 白；将 该 基 因? 在大肠 杆菌 中进 行低 温诱 导表达 ，得 到分子量 为 ??????的重组 蛋 白，经 鲤 鱼肌 肉丝氨酸 蛋 白酶 ???—? ???抗体 检测证 实为 ??，且 重组蛋 白在 大肠杆 菌 细胞 中具 有 明显