对叶百部组织培养快繁技术研究.docVIP

对叶百部组织培养快繁技术研究 　　摘要 试验以对叶百部带侧芽嫩茎为材料，对其进行组培快速繁殖技术研究。结果表明：用0.1%氯化汞对外植体进行消毒处理最佳为10 min，外植体污染率仅为5.9%；木质化程度较轻或未木质化的带侧芽茎段为外植体较优；改良MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L为最佳初始诱导培养基，诱导率为80.0%。改良MS+6-BA 1.5 mg/L+KT1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L为最佳的继代增殖培养基，增殖倍数为4.0。1/2改良MS为基本培养基，在NAA和IBA组合的培养基对生根的作用有明显促进作用，生根率均在58.0%以上，最高生根率达到90%。以草炭为移栽基质移栽，移栽存活率为99.0%，平均苗高增幅为8.8 cm。 　　关键词 对叶百部；组织培养；快速繁殖 　　中图分类号 R282.71 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2016）02-0105-03 　　对叶百部为百部科植物对叶百部（Stemona tuberosa Lour.）的干燥块根，具有润肺下气止咳，杀虫的功效、主治百日咳、久咳不止、肺结核、钩虫病、蛲虫病等，外用杀虱[1]。对叶百部主产于广西，湖南、贵州、四川等地也有分布[2]。广西、福建、贵州、河南等地所产者个较大，山东、江苏、四川、安徽、浙江所产者较细小[2]。对叶百部的主要成分为生物碱类，药理研究表明，对叶百部具有良好的镇咳祛痰，抗菌抗病毒和杀虫等作用[3]。据此，桂林三金药业、广西花红药业、广西金嗓子药业等区内30家制药企业和国内140家制药企业制成颗粒剂、片剂、膏剂、糖浆剂销往全国，可内服，也可外用，多个产品已成为国内外知名品牌，生产企业也成为当地的经济支柱之一。百部药材完全依靠采挖野生资源，而百部自然繁殖能力弱，生长缓慢，3年以上才能形成产量，需求明显大于产出，造成其药材经常缺货断档[4]，发展人工种植已成当务之急。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　供试材料采自桂林亦元生现代生物技术有限公司的种质资源圃。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 材料的采集。在春季选择连续3 d以上晴天9：00―10：00采集茎段作为试验材料[5-7]。 　　1.2.2 外植体的处理。将材料采回实验室后，去除叶片，截取对叶百部带侧芽茎段，放入无菌瓶中，用自来水冲洗1 h；无菌的条件下，用75%酒精浸泡40 s，再用0.1%氯化汞溶液处理，无菌水清洗4～6次，备用。 　　为探讨0.1%氯化汞溶液不同处理时间对对叶百部消毒效果的影响，分别进行6、10、14 min的处理时长，接于相同的培养基中，接种时将外植体斜插入培养基，并以侧芽贴近培养基表面1 mm左右为宜，每个培养瓶接种1个茎段，每个处理接种30瓶以上，培养10 d后统计并观察各处理的培养情况。 　　1.2.3 诱导培养。在无菌条件下，将已灭菌的材料接到诱导培养基中，每个处理接种30瓶，光照培养，30 d后统计结果，试验方案详见表1。 　　试验还选用不同木质化程度的外植体进行诱导培养，分别接种在编号为③的改良MS +6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L诱导培养基上，每种材料接种30瓶，光照培养，分别10、30 d统计结果。 　　1.2.4 继代增殖培养。在无菌条件下，将诱导出的新芽剪切成带1～2个芽的茎段，接于不同的继代培养基中，每个培养瓶接10个茎段，40 d后统计并观察试验结果。 　　继代培养基：改良MS +6-BA 1.0～3.0 mg/L+KT 0～1.0 mg/L+NAA 0～1.2 mg/L+IBA 0～0.3 mg/L。 　　1.2.5 生根培养。在无菌条件下，将继代材料切成带侧芽的切段，接于不同生根培养基中，每个处理接种10瓶以上，每瓶接种20株。接种后置于弱光条件下培养5 d，后光照培养，40 d后统计结果。 　　生根培养基：1/2改良MS+NAA 0～2.5 mg/L+IBA 0～3.0 mg/L+AgNO3 0.5 mg/L。 　　1.2.6 培养条件。试验用培养基均以改良MS为基本培养基，附加蔗糖40 g/L，琼脂粉5.4 g/L，pH值5.8～6.0，生根培养基还添加0.5 g/L活性炭。光照强度为1 400～1 800 lx，光照时间12 h/d，组养温度（25±2）℃。 　　1.2.7 生根苗移栽及管理。将生根苗置于常温下遮荫处炼苗4～5 d，后打开盖子2～3 d，让组培苗逐渐适应外界的环境。将组培苗取出，用自来水将培养基冲洗干净，然后移植到移栽基质中，详见表2。 　　移植前用0.1%高锰酸钾溶液对基质进行消毒，24 h后用清水将高锰酸钾溶液冲洗干净，12 h后再将生根苗移栽到试验基质中。移植后盖